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为了进一步了解虫草菌胞内酸性多糖(Acid polysaccharide fraction，APSF)调节免疫而抗肿瘤的作用机理，探讨APSF对巨噬细胞功能的影响以及对不同亚型巨噬细胞的作用，初步了解APSF对巨噬细胞亚型转变的影响，我们以小鼠巨噬细胞系RAW264.7和Ana-1为研究对象，进行如下研究：
第一部分中初步研究了APSF对RAW264.7免疫功能的影响。通过中性红吞噬实验和FITC-dextran摄入实验检测巨噬细胞吞噬功能，Griess法检测RAW264.7产生NO的功能，RT-PCR检测细胞中iNOS的mRNA水平，免疫细胞化学法检测细胞中iNOS的蛋白水平的变化，Western Blotting检测细胞核中NF-κB的水平。实验结果显示，APSF作用后RAW264.7的吞噬功能增强(100μg/ml，p<0.05)，产生的NO量增加，APSF高浓度时RAW26.7的NO产量显著增加(25μg/ml、50μg/ml，p<0.05；100μg/ml，p<0.01)；同时细胞中iNOS的mRNA(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml，p<0.05)和蛋白水平增高(25μg/ml，p<0.05；50μg/ml、100μg/ml，p<0.01)。Western Blotting结果显示APSF作用后RAW264.7细胞核中NF-κB含量增加(25μg/ml，p<0.05；50μg/ml、100μg/ml，p<0.01)。以上结果显示，APSF可增强RAW细胞的吞噬功能和产生NO的能力，很可能与细胞中IκB-NF-κB信号通路的激活有关。
在第二部分中，为了研究APSF对处于免疫抑制状态的M2型巨噬细胞功能的影响，首先于培养的Ana-1细胞中加入小鼠肝癌细胞株H22的培养上清，诱导Ana-1细胞成M2型巨噬细胞。H22细胞上清作用后，RT-PCR检测Ana-1细胞中TNF-α的mRNA水平，流式细胞术检测Ana-1细胞表面甘露糖受体(MR)和清道夫受体(SR)的表达水平。实验结果显示，H22细胞上清作用Ana-1细胞72 h后细胞中TNF-α mRNA水平显著降低，MR和SR双阳性细胞的比例由5.3％升高到28.1％，说明H22细胞上清成功诱导Ana-1细胞向M2型巨噬细胞转化。在H22细胞上清诱导Ana-1细胞72 h后加入APSF，RT-PCR检测APSF作用后Ana-1细胞中TNF-α、IL-12p40、iNOS和IL-10的mRNA水平，流式细胞术检测细胞表面MR和SR的表达变化，Western Blotting检测APSF作用后Ana-1细胞核中NF-κB水平。结果显示，APSF作用24 h后，Ana-1细胞中TNF-α、iNOS和IL-12p40的mRNA水平提高，IL-10的mRNA水平降低，说明Ana-1细胞产生炎性细胞因子和NO的能力增强，分泌抗炎性细胞因子下降。流式结果显示细胞表面MR和SR的表达降低。Western Blotting结果发现，H22细胞上清诱导Ana-1细胞72 h后细胞核中NF-κB含量降低，但加入APSF作用12 h后，Ana-1细胞核中NF-κB含量又升高，说明H22细胞上清可以抑制Ana-1细胞中NF-κB的激活，而APSF使得Ana-1细胞中的NF-κB重新被激活。因此，APSF可促进M2型巨噬细胞向M1型转变，重新获得肿瘤杀伤能力。