骨桥蛋白在病理性瘢痕中表达的实验研究

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目的:观察骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)在增生性瘢痕(Hypertrophic scar;HS)和瘢痕疙瘩(Keloid)的表达规律,探讨其在病理性瘢痕(Pathological scar)发生、发展过程中的意义,为探索病理性瘢痕的发病机制,寻找新的临床治疗方法提供实验依据。方法:采集临床标本30例,分为增生性瘢痕组(Hypertrophic scar group;HSG)(n=10),瘢痕疙瘩组(Keloid group;KG)(n=10),正常皮肤组(Control group;CG)(n=10)。常规石蜡包埋切片,苏木精-伊红(HE)染色,免疫组织化学技术检测标本组织中骨桥蛋白的表达。免疫组化OPN阳性表达为出现黄色或棕褐色颗粒,采用Ax-70显微成像系统采集实验结果图像,每张切片选取5个视野,并用ImagePro-Plus6.0(IPP6.0)图像分析软件,测得每张照片中阳性颗粒数量、平均光密度和积分光密度值,应用GraphPad Prism 5.0统计软件进行统计处理,所有数据采用单因素方差分析进行统计学检验,两两比较采用t检验。结果:①组织形态学改变:正常皮肤组表皮透明层与角质层相对较厚;真皮乳头突出明显,乳头数目较多;网织层见粗大的胶原,成纤维细胞附着,核小,着色深,细胞质少,呈嗜酸性,数目较少。增生性瘢痕组表皮基底层和棘层细胞相对层数较多,其细胞间连接较正常皮肤显得松散;颗粒层变薄;透明层与角质层变薄明显;真皮乳头突出度较正常皮肤低矮,较平,乳头数目较正常皮肤减少;网织层较厚,较致密,见粗大的胶原,染色深,较不规则,并可见血管、淋巴管,毛细血管扩张;成纤维细胞两层均见,细胞较大,核较小,着色较深,细胞质较多,呈弱嗜碱性,数目多。瘢痕疙瘩组表皮萎缩,基底层、棘层细胞胞体大,层数增加,相对层数较多;颗粒层、透明层与角质层仅见较薄的嗜酸性染色层,无法区分;真皮乳头数目少,低平;网织层厚,致密,见粗大的胶原,染色深,不规则,排列紊乱,有玻璃样变性,并可见血管、淋巴管,毛细血管闭锁;成纤维细胞两层均见,细胞较大,核较大,着色浅,核仁明显,细胞质较多,呈弱嗜碱性,数目多。②表皮免疫组化改变:OPN染色呈黄色、黄棕色或黄褐色颗粒,在CG仅表皮基底层有表达,而HSG, KG表皮基底层、棘层等均有表达。免疫组化图像分析结果显示,CG、HSG、KG各组OPN阳性颗粒数量分别为45.70±4.39,74.20±6.98,80.30±7.02。HSG和KG较CG显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);HSG与KG间差异无统计学意义(P>0.05)。CG、HSG、KG各组平均光密度值分别为0.2246±0.0017,0.2329±0.0010,0.2410±0.0018,HSG.KG较CG升高,KG较HSG升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。CG、HSG、KG各组积分光密度值分别为1293±45.52,1622±148.4,1924±134.3,HSG、KG较CG升高,差异有统计学意义(P<0.05);HSG与KG间差异无统计学意义(P>0.05)。③真皮免疫组化改变:OPN染色呈黄色、黄棕色或黄褐色颗粒,在CG真皮层表达不明显,HSG、KG真皮均表达明显,特别在KG中染色强度强、数量多。真皮免疫组化图像分析结果显示,CG、HSG、KG各组OPN阳性颗粒数量分别为44.70±4.006,102.5±1.682,125.1±7.622,HSG、KG较CG增多,KG较HSG增多,差异有统计学意义(P<0.05)。CG、HSG、KG各组平均光密度值分别为0.1995±0.0021,0.2228±0.0017,0.2329±0.0009,HSG、KG较CG增高,KG较HSG增高,差异有统计学意义(P<0.05)。CG、HSG、KG各组积分光密度值分别为1092±21.65,1386±73.82,1968±76.49,HSG、KG较CG增高,KG较HSG增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:①OPN在正常皮肤中有表达,其分布主要在基底层。②病理性瘢痕组织中存在OPN的表达增加,以瘢痕疙瘩表达更明显。③OPN在病理性瘢痕中表达差异主要在真皮层。
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