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目的：探讨山奈酚、5-FU以及二者联合用药对大肠癌细胞的抗癌效果,评价其协同作用。从抑制增殖、诱导凋亡、抑制5-FU代谢的关键酶的作用三个方面探讨山奈酚协同5-FU的作用机制。方法：1.山奈酚联合5-FU抗大肠癌细胞的作用：(1)通过MTT方法检测山奈酚、5-FU对大肠癌(HCT-8、HCT-116)细胞活力的影响,并计算各药的IC50。(2)固定比率法观察不同比率的山奈酚联合5-FU对大肠癌细胞HCT-8、HCT-116活力的影响,并计算Combination index (CI),评价其协同作用。 (3)观察不同的比率的山奈酚联合5-FU对人胚肾细胞的毒作用,确定5-FU及山奈酚的联合浓度。2.山奈酚联合5-FU抗大肠癌作用机制研究：(1)大肠癌细胞经5-FU、山奈酚及两药联合干预后,通过集落形成实验观察山奈酚联合5-FU对大肠癌生长的影响；(2)大肠癌细胞经5-FU、山奈酚及两药联合干预后,通过流式观察山奈酚联合5-FU对大肠癌细胞周期的影响；(3)大肠癌细胞经5-FU、山奈酚及两药联合干预后,通过Hoechst染色及流式观察山奈酚联合5-FU对大肠癌细胞凋亡影响；(4)Q-PCR和Western Blot (WB)方法检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2、抑癌基因P53、5-FU相关代谢酶TS、DPD及相关通路的影响,从抑制增殖、诱导凋亡、抑制5-FU相关代谢酶等方面进一步阐明山奈酚联合5-FU抗大肠癌的作用机制。结果：1.山奈酚联合5-FU抗大肠癌细胞的作用：(1)5-FU干预HCT-8和HCT-116细胞的IC50分别为177.78 μM和77.63μM；山奈酚干预HCT-8和HCT-116细胞后分别为350 μM和184.33μM。 (2)当5-FU浓度为50μM,山奈酚浓度为100μM时,联合用药组大肠癌细胞HCT-8效果最佳,其CI=0.351(CI<1),表明二者具有协同作用,且作用显著。当5-FU浓度为20μtM,山奈酚浓度为100μM时,二者联合对HCT-116效果最佳,其CI=0.621(CI<1),表明二者具有协同作用,且作用显著。(3)5-FU与山奈酚联合干预HEK-293细胞,联合组的细胞毒作用小于5-FU单独用药组,其CI>I,表明二者具有拮抗作用。2.山奈酚联合5-FU抗大肠癌作用机制研究： (1)集落实验表明5-FU组及5-FU联合山奈酚组,集落形成数量逐渐减少,表明5-FU联合山奈酚干预可显著降低HCT-8细胞的存活能力。 (2)细胞周期实验表明大肠癌细胞经5-FU联合山奈酚干预后,G1期比例升高,S期比例下调。(3)通过Hoechst染色及流式观察细胞凋亡,发现联合组中细胞发生凋亡的比例(31.41%)约为5-FU组(10.13%)的细胞凋亡率的3倍。 (P<0.05) (4)QPCR及WB实验表明联合组能够升高Bax的表达,降低Bcl-2的表达,且与单独用药组相比,具有显著差异,且山奈酚组及联合组都有降低5-FU代谢卡丌关酶TS和DPD,此外联合组显著降低了由于5-FU干预引起的P13K及p-AKt的表达。结论：山奈酚联合5-FU干预大肠癌细胞(HCT-8、HCT-116),与单独用药相比,能显著降低细胞活力,具有协同抗肿瘤的作用(CI<1),联合组细胞凋亡率显著高于单独用药组,且与单独用药组相比,山奈酚联合5-FU使凋亡相关基因Bax显著上调、Bcl-2显著下调、且抑制5-FU相关代谢酶TS、DPD的表达,此外联合组显著降低了由于5-FU干预引起的P13K及p-AKt的表达,表明山奈酚联合5-FU抗大肠癌的作用机制可能包括调控PI3K/Akt通路,协同抑制细胞增殖、诱导大肠癌细胞凋亡、抑制5-FU相关代谢酶TS、DPD等。更进一步的作用机制有待更深入的研究以及动物体内实验的验证。