USPIO标记小鼠调节性T细胞体外初步研究

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目的利用超小超顺磁性氧化铁(USPIO)核磁共振对比剂体外标记调节性T细胞,检测USPIO对比剂对调节性T细胞的生物学影响,从而为核磁共振成像(MRI)在器官移植受者中监测回输体内的USPIO标记的调节性T细胞的分布等提供依据。方法采用调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)分选试剂盒分离纯化小鼠自然Treg。将分离出的小鼠脾脏淋巴细胞与浓度分别为0.01、0.05、0.10、0.15mg/ml的二巯基琥珀酸(DMSA)包被的USPIO共孵育3h,6h,12h,24h,采用普鲁士蓝染色和原子吸收分光光度计法检测USPIO的淋巴细胞摄取率,并用采用噻唑蓝(MTT)活细胞染色方法检测标记后的淋巴细胞的活性。筛选出合适的USPIO浓度,以该浓度的USPIO标记分离纯化的Treg。流式细胞仪检测(FCM)USPIO标记前后的Treg内Foxp3的表达状况。通过对Treg对淋巴细胞增殖的抑制作用的检测来判断Treg的功能变化。MRI扫描用琼脂凝胶固定的USPIO标记的细胞悬液,了解标记前后的细胞信号变化情况。结果Treg能够摄取USPIO,USPIO的摄取量随USPIO的浓度改变而变化,USPIO的浓度越大Treg摄取的量越大,反之亦然;USPIO在一定浓度范围内,对Treg生物学特性如细胞活性、细胞表型等无明显影响,仍能使Treg维持一定的免疫调节功能。MRI扫描图像显示USPIO标记的Treg T2加权相信号明显降低。结论DMSA包被的USPIO可以成功地在体外标记Treg。一定浓度USPIO对Treg的表型、活力、免疫调节作用无明显影响。
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