论文部分内容阅读
目的:探讨赭曲霉毒素A(OTA)诱导的肾细胞(HEK293T细胞)氧化应激以及该过程与自噬的关系。方法:以HEK293T细胞为实验对象,通过OTA对细胞进行染毒,运用CCK-8增强型试剂盒对细胞活性进行检测;运用活性氧检测试剂盒检测ROS表达水平;通过Western blot检测自噬通路中关键蛋白(p-ULK1、p-Beclin1、p-mTOR、LC3-B)和氧化应激相关蛋白(ATM/LKB1/AMPK通路及TRAP1、VDAC1和LONP1)的表达情况。结果:1.OTA处理HEK293T细胞24小时后CCK-8结果表明:与对照组(不予以任何处理)相比1μM、3μM和5μM组均促进细胞生长,细胞存活率分别是105.1%、121.7%和121.3%;7μM、8μM、9μM及10μM组表现为抑制细胞生长,其中7μM组细胞存活率为89.6%,8μM组细胞存活率为49.4%,9μM组细胞存活率为10.5%,10μM组细胞存活率为5.7%。2.Western blot检测自噬相关蛋白结果显示OTA处理组中p-ULK1、p-Beclin1以及LC3B蛋白的表达明显高于对照组(不予以任何处理),该结果表明OTA诱导了HEK293T细胞自噬的发生,且8μM组自噬发生的水平高于7μM组。同时,8μM组及7μM组TRAP1、VDAC1和LONP1蛋白表达均明显低于对照组(不予以任何处理)。表明7μM和8μM OTA处理HEK293T细胞抑制了TRAP1、VDAC1和LONP1蛋白的表达。3.活性氧检测试剂盒检测结果表明OTA诱导细胞ROS水平升高,其中8μM组ROS荧光强度(?)=138.33,7μM组ROS荧光强度(?)=37.70,对照组(不予以任何处理)荧光强度(?)=1.36。4.与对照组(不予以任何处理)比较8μM组p-ATM、p-LKB1和p-AMPK蛋白表达明显增高,7μM组p-ATM、p-LKB1和p-AMPK蛋白的表达无明显变化,该结果表明8μM OTA诱导细胞氧化应激激活了ATM/LKB1/AMPK信号通路。5.与对照组(不予以任何处理)比较7μM组p-mTOR蛋白表达无明显变化,8μM组p-mTOR蛋白的表达明显低于对照组(不予以任何处理)。结论:(1)OTA处理诱导了HEK293T细胞氧化应激的发生,并且诱导了自噬发生,其中8μM处理诱导的氧化应激进一步激活ATM/LKB1/AMPK信号通路。(2)OTA处理抑制了HEK293T细胞TRAP1蛋白、LONP1蛋白及VDAC1蛋白的表达。