【摘 要】
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随着臭氧层不断遭到破坏,到达地球表面的UV-B辐射逐年增加,高剂量的UV-B辐射会对植物生长和发育造成严重影响。通过正向遗传学方法,我们筛选到了一个对UV-B敏感的突变体(csaat1a-3),基因克隆结果显示在csaatla-3中,T-DNA插入位置在Atlg27840的启动子区域。Atlg27840编码一个与哺乳动物中CSA同源的蛋白,csaatla-3突变体中CSAatlA表达量比野生型下降
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随着臭氧层不断遭到破坏,到达地球表面的UV-B辐射逐年增加,高剂量的UV-B辐射会对植物生长和发育造成严重影响。通过正向遗传学方法,我们筛选到了一个对UV-B敏感的突变体(csaat1a-3),基因克隆结果显示在csaatla-3中,T-DNA插入位置在Atlg27840的启动子区域。Atlg27840编码一个与哺乳动物中CSA同源的蛋白,csaatla-3突变体中CSAatlA表达量比野生型下降。拟南芥中还存在一个与CSAat1A高度同源的蛋白CSAat1B,完全缺失CSAat1A或CSAat1B的突变体表现出比csaat1a-3对UV-B和MMS (Methyl Methanesulfonate)更敏感的表型。酶联免疫实验结果表明在DNA修复过程中csaat1a和csaat1b突变体中CPD的含量比野生型高,而在DNA损伤过程中与野生型无差别。Southern Blot结果显示在CSAat1A和CSAat1B的缺失突变体中TCR修复功能比野生型下降。酵母双杂交结果显示CSAat1A和CSAat1B均能与DDB1A (UV-Damage DNA Binding Protein1)相互作用,免疫共沉淀结果表明CSAat1A和CSAat1B均能与CUL4 (CULLIN4)-DDB1A形成复合物,Split-YFP结果证明相互作用发生在细胞核内,由这些这些结果可知CUL4-DDB1-CSA是一个细胞核内的E3泛素连接酶。免疫共沉淀、Split-YFP和分子筛实验证明CSAat1A和CSAat1B能在细胞核内形成异源四聚体。综上所述,CUL4-DDB1CSAat1A and B代表一类新的通过促进底物的泛素化来应答DNA损伤的E3复合物。
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