α<,2>-肾上腺素受体参与调节T淋巴细胞功能的研究

来源 :南通大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:computer2900
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目的:我们实验室以前的研究已从功能上说明淋巴细胞存在α-和β-肾上腺素受体,这些受体参与调节淋巴细胞的功能。但目前还没有直接的证据说明淋巴细胞表达和合成α-肾上腺素受体(α-adrenoreceptor,α-AR),且α-亚型肾上腺素受体在调节淋巴细胞功能中的介导作用目前还知之甚少。因此,本研究首先从分子水平揭示T淋巴细胞表达两种亚型α-AR——α1和α2-AR mRNA的现象,然后探讨这些受体在调节T淋巴细胞功能中的介导作用及其相应的细胞内信号转导机制,从而为神经—内分泌—免疫调节网络提供更多的实验依据。方法:取大鼠肠系膜淋巴结细胞,用尼龙毛柱粘附法分离和纯化T淋巴细胞,应用E花环法检测T细胞的分离纯度。用逆转录—聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测静息T细胞和活化T细胞的α-AR mRNA的表达。用α1-AR激动剂苯肾上腺素、α2-AR激动剂可乐定、α2-AR拮抗剂育亨宾、磷脂酶C(phospholipase C,PLC)抑制剂U-73122和蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)抑制剂Chelerythrine分别作用于淋巴细胞,然后应用噻唑兰(methyl-thiazole-tetrazolium,MTT)比色法检测这些淋巴细胞对刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)刺激的增殖反应;并应用酶联免疫吸附分析(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法测定用Con A刺激的淋巴细胞培养物上清液中白介素—4(interleukin-4,IL-4)的水平。结果:经过对肠系膜淋巴结细胞的分离和纯化,获得的T细胞的纯度明显高于未分离和纯化的淋巴细胞,但分离纯化后的T细胞,其活性仍然保持与分离前T细胞的活性相似。这些纯化的T细胞在静息状态时可表达α1-AR mRNA和α2-AR mRNA,但T细胞用Con A刺激后,表达α1-AR mRNA和α2-AR mRNA都明显高于静息的淋巴细胞。本研究所用的4个浓度的α1-AR激动剂苯肾上腺素(10-9~10-6mol/L)均没有显著影响Con A诱导的淋巴细胞增殖反应;而同样4个浓度的α2-AR激动剂可乐定(10-9~10-6mol/L)均可明显抑制Con A诱导的淋巴细胞增殖反应,但各浓度之间没有显著差异。不同浓度的α2-AR拮抗剂育亨宾(10-10~10-5mol/L)都能阻断可乐定(10-9 mol/L或10-6mol/L)的抑制T细胞增殖的作用。同样,不同浓度的PLC抑制剂U-73122(10-10~10-7 mol/L)和PKC抑制剂chelerythrine(10-10~10-7mol/L)都可阻断可乐定(10-9mol/L或10-6mol/L)的抑制T细胞增殖的作用。此外,可乐定(10-9mol/L)可抑制Con A诱导的T细胞产生和释放细胞因子IL-4,而育亨宾(10-9mol/L)、U-73122(10-9mol/L)和chelerythrine(10-9mol/L)均能阻断可乐定的抑制IL-4产生和释放的作用。结论:T淋巴细胞能表达两种α亚型肾上腺素受体——α1-AR和α2-AR,并且活化的T细胞表达α1-AR和α2-AR均增强。α1-AR可能不参与调节T淋巴细胞的增殖反应;而α2-AR可抑制T淋巴细胞的功能,这种作用可能经淋巴细胞内的PLC和PKC路径实现。上述结果提示,在机体内,交感神经和肾上腺髓质所释放的去甲肾上腺素和肾上腺素有可能通过α2-AR及相应的细胞内信号转导途径来抑制T淋巴细胞的功能。
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