多效生长因子PTN具有促血管生成,有丝分裂原活性等功能,并且参与多种生物学过程。由于其在多种肿瘤中均有表达,但作用机制尚不清楚,从而成为近年来的研究热点。天然重链抗体发现于骆驼体内,又被称作纳米抗体。纳米抗体因其分子量小、耐受性高、具有广泛的抗原结合活性等优点,及其在某些人畜共患病的监测和治疗过程中起到的良好作用,也同样引起了人们的高度重视。本实验通过人工合成PTN基因,构建了His6-SUMO-PTN重组质粒,并诱导它在T7 Shuffle大肠杆菌中正确表达。用纯化得到的PTN片段蛋白作为完全抗原免疫羊驼淋巴结附近多点注射抗原。基础免疫为等量抗原与弗氏完全佐剂进行乳化,每周进行一次加强免疫,加强免疫用等量抗原与等量弗氏不完全佐剂乳化,总共免疫6次。每次免疫前颈静脉取血15ml,第二次免疫后6h、12h及24h也各取血15ml,4°C,静置24h后收集析出的血清。实验结果表明:(1)通过融合His6-SUMO标记的PTN与pelB信号肽成功建立了重组PTN的分泌表达系统;(2)收集菌体后使用Ni-NTA纯化并回收得到重组PTN蛋白;(3)采用间接ELISA法检测血清抗体效价,检测得到为1:100;(4)观察注射后不同时间内羊驼体内各细胞因子的变化情况,结果表明PTN抗原免疫羊驼后,羊驼血清内各细胞因子变化趋势如下:TNF-α、IL-2、IL-6、IL-5、IL-10含量水平均呈现先升高后降低的趋势,IFN-γ与IL-4变化规律不明显。IL-4与IL-6,IL-5与TNF-α呈显著性正相关,其他细胞因子间相关性不明显。