论文部分内容阅读
目的：探索人胚骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell，MSC)的体外增殖条件和定向分化为多巴胺能神经元的诱导条件；同时，以逆转录病毒为载体，尝试把人bFGF基因转入MSC，为进一步利用MSC进行帕金森疾病的细胞替代治疗和基因治疗提供理论基础。 方法：采用MTT比色法检测不同接种密度、不同浓度的胎牛血清、EGF和PDGF-BB对MSC生长的影响；应用RA、bFGF、FGF-8和BDNF对不同代数的MSC进行诱导，通过细胞免疫荧光和Western blot鉴定诱导后的细胞；构建pLXSN-bFGF病毒质粒，脂质体转染PA317包装细胞，G418筛选，PCR鉴定抗性克隆中bFGF基因的整合情况，制备相应的病毒，感染MSC。 结果：以接种密度为1×10~4个／ml、加入10％胎牛血清、10ng／ml EGF和10ng／ml PDGF-BB的培养条件最有利于MSC的增殖；MSC经RA诱导后定向分化为不具备多巴胺能神经元表型的神经元样细胞，经bFGF、FGF-8和BDNF诱导后，大部分细胞定向分化为神经元样细胞而非神经胶质细胞，其中约20％的细胞还获得了多巴胺能神经元的表型；各代MSC之间的分化效果无明显差别；pLXSN-bFGF病毒质粒转染PA317包装细胞后，能筛选出抗性克隆，PCR鉴定结果为阳性；pLXSN-bFGF病毒转染MSC后，经过G418的筛选，只得到少量的抗性细胞，而无法增殖形成克隆。 结论：成功优化了MSC的增殖条件，建立了体外诱导MSC定向分化为多巴胺能神经元样细胞的方法，为利用MSC进行帕金森疾病治疗的研究提供了理论依据；成功建立了能产生有感染能力病毒颗粒的PA317-bFGF包装细胞株，制备了pLXSN-bFGF病毒，为进一步开展有关bFGF的基因治疗提供了重要的物质基础。