【摘 要】
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该研究旨在构建小鼠β2m基因打靶载体和正、反义核酸表达载体,转染胚胎干细胞或者间充质干细胞,以封闭或者降低β2M基因的表达,从而降低MHCⅠ类分子的表达.然后定向诱导细胞
【出 处】
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中山医科大学 中山大学中山医学院 中山大学
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该研究旨在构建小鼠β2m基因打靶载体和正、反义核酸表达载体,转染胚胎干细胞或者间充质干细胞,以封闭或者降低β2M基因的表达,从而降低MHCⅠ类分子的表达.然后定向诱导细胞分化,建立MHCⅠ类分子低表达或者不表达的细胞、组织或者器官,解决异体移植排斥反应的难题,为异体组织器官移植提供有价值的研究基础和材料.结论:1、构建成两种小鼠β2M基因打靶载体-β2m-pPNT1和β2m-pPNT2.2、用β2m-pPNT对小鼠干细胞进行β2m基因敲除,降低β2m基因的表达,进而降低MHCI类分子的表达,建立β2m低表达或者不表达的干细胞系;并定向诱导其分化以后,进行组织或者器官移植研究.3、许多实验证实,互补于靶RNA5端及主要的编码区的反义RNA的作用效果最好.4、成功构建出小鼠β2m正、反义核酸表达载体pcDNA3-β2mSN、pcDNA3-β2mAN.5、间充质干细胞的意义远远超过支持造血,它具有多向分化潜能,在适宜条件下,可以被诱导为成骨细胞、软件细胞、脂肪细胞、肌细胞及神经细胞等,MSC的这一特点为自体组织移植提供了新的细胞来源.6、构建β2m反义核酸重组绿色荧光蛋白(GFP)表达载体pGEFP-β2mAN,7、利用基因转染技术,将小鼠β2m正、反义核酸表达载体pcDNA3-β2mSN、pcDNA3-β2mAN及对照质粒pcDNA3转入NIH3T3细胞,利用RT-PCR技术观察β2mmRNA的瞬时表达及稳定表达改变情况.
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