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本论文针对我实验室前期的基因芯片研究结果,对缺铁胁迫下水稻根中两个上调表达基因OsSec27p和OsYSL1分别进行了克隆、亚细胞定位及功能分析。
在对缺铁5天处理的水稻根进行cDNA芯片和realtime-PCR分析时均检测到OsSec27p高表达。在比对芯片中原始的EST序列时发现该基因与酵母中的Sec27p略有同源故命名为OsSec27p。OsSec27p的全长cDNA已被克隆并提交至GenBank,并获得登陆号DQ434847。用报告基因gfp和分子探针FM4-64对其进行亚细胞定位,发现pCAMBIAl302-OsSEC27p::GFP定位于细胞质膜和内膜系统上的小膜泡中。随后,用农杆菌介导将其转入烟草中,并对T<,1>和T<,2>代株进行了分子检测和生理指标检测。应用非损伤性离子扫描技术对转基因烟草幼根进行H<+>流动情况的检测,发现OsSec2727p基因与氢质子的外向分泌有关。
另一方面,克隆OsYSL1并构建植物表达载体pCAMBIAl302-OsYSL1-gfp和表达载体pGPTV-AGPp-BAR-OsYSL1。将重组质粒pCAMBIAl302-OsYSL1-gfp分别转入洋葱表皮细胞和BY-2烟草悬浮细胞中,并进行了细胞定位研究,结果显示OsYSL1定位于细胞质膜上。同时,将重组质粒pGPTV-AGPp-BAR-OsYSL1转入水稻愈伤中进行转基因实验。对OsYSL1进行序列分析发现其与玉米中的ZmYS1有43.43﹪同源性。因此初步推断它可能和ZmYS1一样是一个高铁载体转运蛋白。