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骨组织不断更新,保持生命活力主要依靠骨代谢平衡,此平衡一旦被打破即可导致各种代谢性骨病。动物骨营养不良性疾病主要是由于破骨细胞(osteoclasts,OC)引起的骨吸收大于成骨细胞(osteoblasts,OB)引起的骨生成而引起。其中,OC的形成及吸收活性主要受核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)调控。目前研究发现,1α,25-(OH)2D3不仅能宏观上调节动物对钙、磷的吸收,还能直接作用于成骨细胞,通过RANKL/RANK/OPG系统调节骨代谢,亦有认为1α,25-(OH)2D3能直接作用于OC,但报道很少。RANKL的表达和分泌诱导单核巨噬细胞形成OC。因此进一步理解维生素D对骨细胞调节的确切机制有助于更好地防治代谢性骨病。本文以破骨细胞前体细胞RAW264.7小鼠单核巨噬细胞株作为研究对象,探讨了不同培养条件方法对细胞生物学特性的影响。并在此基础上研究了不同浓度RANKL(25.50.100ng/ml).1α,25-(OH)2D3(1×10-9、1×10-8、1×10-7mol/L)对细胞增殖的影响,以及1α,25-(OH)2D3对RAW264.7细胞分化形成OC及对骨吸收活力的影响,为1α,25-(OH)2D3治疗骨代谢性疾病提供理论性的依据。取得如下结果：(1)优化了RAW264.7细胞培养方法。传统消化法约需10～15min才能使细胞消化下来,而改良的消化方法只需3～5min就可以使细胞消化下来,降低了胰酶对细胞的损伤。改良方法中细胞贴壁快,形态良好,增殖迅速。慢速冻存法复苏后细胞的成活率(88.7%)极显著高于快速冻存法(81.8%)(P<0.01)。说明两次胰酶消化法及慢速冻存法更适合RAW264.7细胞生长,细胞状态良好。(2)不同浓度的RANKL均可抑制RAW264.7细胞增殖,且随着浓度增加,抑制作用增强。培养3d,100ng/ml RANKL组细胞增殖率极显著低于对照组(P<0.01)。培养4d时,50及100ng/ml RANKL组细胞增殖率均极显著低于对照组(P<0.01),并且TRAP阳性多核OC数极显著多于对照组和25ng/ml RANKL组(P<0.01),各浓度RANKL组象牙片均出现明显吸收陷窝。各浓度1α,25-(OH)2D3均促进RAW264.7细胞增殖,且随1α,25-(OH)2D3浓度增加,促进作用增强。培养3d,1×10-9、1×10-8、1×10-7mol/L1α,25-(OH)2D3组细胞增殖率均极显著高于对照组(P<0.01),并且各浓度1α,25-(OH)2D3组较单独添加RANKL组TRAP阳性多核OC数增加,象牙片吸收陷窝更深。说明RANKL抑制细胞增殖,促进OC形成和活化,1α,25-(OH)2D3促进细胞增殖,并能增强RANKL对OC形成和吸收的诱导作用。