糖尿病被称为健康杀手,对人体造成很大的威胁。目前对糖尿病只能治疗,未能治愈,糖尿病患者长期高血糖会引起一系列并发症,慢性心血管疾病,慢性肾衰竭及视网膜损伤等而丧失生命。研究通过抑制体内产生葡萄糖的酶(α-葡萄糖苷酶和DPP-IV酶),间接阻止葡萄糖进入血液循环而引起高血糖。酶的抑制源于生物反应,因而目标聚集在源于天然动植物蛋白中的生物活肽,这种小肽相比于原蛋白质具有多种生物活性,无复杂空间结构,理化性质稳定,且分子链段小易于人体吸收,为治疗糖尿病提供了安全,有效的新途径。本研究目的是以天然蛋白质为原料,利用酶解法制备具有降糖活性的多肽,本研究以抑制α-葡萄糖苷酶活性为指标,确定了多肽制备的方法。同时实验结果表明该多肽还具有抗氧化及降压活性,且消化过程对降糖、降压和抗氧化活性有一定促进的作用。本研究对具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的多肽片段进行纯化、鉴定及活性验证。以乳清浓缩蛋白、绿豆分离蛋白及大豆分离蛋白为肽源,利用α-葡萄糖苷酶抑制活性和水解度两个指标对不同肽进行筛选,大豆分离蛋白经碱性蛋白酶水解8 h得到的多肽溶液α-葡萄糖苷酶抑制活性最好,抑制率达到53.79±1.14%。因此,实验确定降糖活性多肽的制备方法为(2%)大豆分离蛋白经碱性蛋白酶(6000 U/g底物)水解8 h,水解度为36.84±1.20%。对制备的大豆多肽进行了分子量分布测定,结果表明分子量范围在180-1000 Da的小分子占整体多肽的72.23%,氨基酸结果分析该多肽的疏水性氨基酸含量占比较高为27.57%,其对于多肽对α-葡萄糖苷酶抑制活性有重要作用。测定了该多肽对二肽基肽酶IV(DPP-IV)抑制率为56.52±0.72%,ACE酶抑制率为35.33±1.64%,对羟自由基清除效果及总还原能力均显示出较好的生物活性。为了解多肽的消化特性,本实验研究了多肽经胃肠模拟消化后对α-葡萄糖苷酶,DPP-IV和血管紧张素调节酶(ACE)抑制活性的影响,结果显示这三种生物活性值在胃肠消化刺激后均有不同程度的增加,α-葡萄糖苷酶抑制率由29.04±1.82%显著上升至77.64±1.53%;DPP-IV酶抑制率由40.85±0.74%上升至47.94±1.02%;ACE酶的抑制率由20.31±1.66%提高至51.43±1.27%。为明确具有α-葡萄糖苷酶活性多肽的氨基酸序列,采用离子交换色谱DEAE-52和葡聚糖凝胶色谱Sephsdex-15进行连续的分离,得到针对于α-葡萄糖苷酶起抑制效果的多肽片段。并使用串联质谱LC-MS/MS来表征色谱分离纯化体系的氨基酸序列。得到了三种LLPLPVLK,SWLRL和WLRL新型α-葡萄糖苷酶抑制肽,IC50分别为237.43±0.52μmol/L,182.05±0.74μmol/L,165.29±0.74μmol/L。因此,从大豆蛋白中水解得到的小肽是可用于控制糖尿病的保健食品中潜在的活性成分。