EB病毒BARF1原型和变异型基因对鼻咽癌细胞生物学行为的影响

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背景和目的:EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)编码早期基因BARF1是新近确立的EBV致癌基因之一,其转化作用已在多种细胞系中得到证实。由于BARF1在多数鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)和EBV相关胃癌组织中表达,推测其可能在NPC、胃癌等上皮细胞性肿瘤的发生中发挥重要作用。我们前期在检测BARF1基因多态性时发现V29A变异型在NPC中的检出率高于健康人群。本研究旨在探讨BARF1基因对NPC细胞系肿瘤原性的影响以及BARF1基因变异型对其致癌潜能的影响,为研究BARF1参与NPC的作用及机制提供依据。方法:构建BARF1基因原型(B95-8)和变异型(V29A)慢病毒表达载体,分别转染EBV阴性NPC细胞系CNE,杀稻瘟菌素筛选,RT-PCR和qRT-PCR鉴定目的基因表达获得BARF1原型和变异型基因稳定转染细胞。以对照病毒转染细胞为对照,进行MTT实验、细胞周期检测、平板克隆形成实验、凋亡诱导实验和细胞迁移实验,检测BARF1原型和变异型基因对CNE细胞生物学行为的影响。结果:(1)成功构建BARF1基因原型和变异型基因稳定转染细胞,2种基因在EBV阴性NPC细胞系中均能有效表达。(2)细胞增殖实验:BARF1原型和变异型基因转染细胞及对照病毒转染细胞MTT吸光度值、平板克隆形成率和细胞周期细胞增殖指数均无显著性差异(P均大于0.05)。(3)凋亡诱导实验:顺铂(2μg/ml)诱导48h,感染BARF1原型和变异型慢病毒细胞的存活率均高于对照病毒感染细胞,差异有显著性(P均小于0.05),而细胞凋亡率低于对照病毒感染细胞,差异有显著性(P均小于0.05),变异型与原型之间细胞存活率和凋亡率均无显著性差异(P均大于0.05)。(4)细胞迁移实验:BARF1原型和变异型慢病毒感染细胞的迁移能力高于对照病毒感染细胞,差异有显著性(P<0.05),变异型与原型之间细胞迁移无显著性差异(P>0.05)。结论:(1)BARF1基因对EBV阴性NPC细胞系CNE无明显促增殖作用,但可提高其抗凋亡能力和迁移能力,从而增强CNE细胞肿瘤原性,在NPC发生发展过程中可能起重要作用。(2)BARF1V29A变异型对BARF1致癌潜能无明显影响。
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