查尔酮合成酶(Chalcone Synthase；CHS； EC2.3.1.74)是黄酮类化合物生物合成的关键酶。其催化基于苯丙素途径CoA分步缩合，此途径是丙二酰CoA连有三乙酸盐部分产生C15类化合物骨架——柑橘素查尔酮。主要中间产物的异构化和延伸置换最终合成黄酮类、异黄酮及花青苷类化合物。CHS的活性是由各种外界刺激或植物发育及组织分化的内源机制明确调控，与不同种类的黄酮化合物特定功能有关。本论文主要研究东北林区主要松科树种——红松，采用RT-PCR法从红松不定芽中克隆获得查尔酮合成酶基因PkCHS，并研究多种外源因素对其表达的影响，为科学、合理开发松多酚资源提供重要的基础理论依据。以本实验室组织培养的红松不定芽为实验材料，提取总RNA；逆转录合成cDNA第一链，并进行PCR扩增；将含有目的基因的PCR产物回收，与pGM-T载体连接，导入TOP10感受态细胞；提取阳性克隆质粒，进行PCR扩增；阳性克隆的测序结果表明，PkCHS基因cDNA序列长度为1188bp，编码395个氨基酸。基因同源性分析结果表明，PkCHS与北美乔松CHS基因同源性最高，为98.74%；氨基酸同源性分析表明，PkCHS与北美乔松的CHS同源性最高，达到98.79%。考察各种外源因素对松多酚含量的影响，结果发现葡萄糖抑制松多酚合成，低温和棉子糖能够促进松多酚合成。采用实时荧光定量PCR对PkCHS基因表达分析，发现葡萄糖可以抑制PkCHS基因表达，而低温和棉子糖可以促进PkCHS基因的表达。