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目的本研究旨在探索弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma DLBCL)肿瘤组织(瘤内和瘤周)中FOXP3蛋白的表达情况,分析其在不同病理亚型中的表达差异,并探讨肿瘤细胞内及瘤周FOXP3阳性细胞的预后意义。方法回顾性分析经天津市肿瘤医院确诊的164例DLBCL患者的完整资料。分析其性别、年龄、ECOG评分、Ann Arbor分期、IPI评分、骨髓是否累及、B症状有无、结外受累数目、血乳酸脱氢酶(LDH)数值、治疗模式、病理亚型(生发中心来源GCB与非生发中心来源non-GCB)等临床资料。以CD20作为DLBCL肿瘤细胞的标记,以FOXP3作为FOXP3+Tregs的细胞标记,采用免疫组化及免疫荧光双染色方法检测肿瘤细胞内和瘤周组织中FOXP3蛋白的表达,分析CD20和FOXP3蛋白的表达与DLBCL临床病理特征及病理亚型的关系,以及其对患者预后的影响。采用实时定量PCR、Western Blot方法检测不同病理亚型的DLBCL细胞系中FOXP3的表达情况。结果1、通过免疫组化,我们发现FOXP3、CD20蛋白在DLBCL组织中呈不同程度的阳性表达。DLBCL组织癌巢中FOXP3多呈弥漫、散在分布,未见明显的密集趋势。癌旁组织中FOXP3+Treg细胞呈少量散在分布,无淋巴样聚集。DLBCL癌巢中CD20呈明显的密集趋势；癌旁组织中CD20阳性细胞呈稀疏散在分布,并且呈淋巴样聚集。2、免疫荧光双染色中,CD20抗体标记DLBCL肿瘤细胞膜呈绿色荧光；FOXP3抗体标记FOXP3+阳性细胞核呈红色荧光。同时被绿色荧光和红色荧光标记的细胞为FOXP3阳性的DLBCL细胞,仅被红色标记细胞核的细胞为肿瘤间质中散在的FOXP3+Treg细胞。FOXP3蛋白在DLBCL瘤内与癌旁组织中表达率之间的差异具有统计学意义(χ2=3.29, P=0.02)。FOXP3蛋白在GCB、 non-GCB亚型瘤内的表达之间的差异具统计学意义(P<0.05)。3、肿瘤内(CD20+组织)高密度FOXP3+表达与多种不良的临床病理学特征之间关系密切,包括与DLBCL分期较晚(P=0.031)、结外受累(P=0.046)、IPI (3-4分)(P=0.050)non-GCB分型(P=0.021)有关。而瘤内(CD20+组织)高FOXP3+表达与患者的性别、年龄、LDH水平、以及骨髓受累无关(P>0.05)。相反的是,瘤周(CD20-组织)中FOXP3+Treg细胞与弥漫大B细胞淋巴瘤较好的临床病理特征显著相关性,如正常的LDH(P=0.039)、较少的结外受累(P=0.041)、IPI(0-2分)(P=0.024),GCB分型(P=0.048)。4、FOXP3蛋白的表达与DLBCL患者OS及PFS的关系：年龄(P=0.023)、结外受累(P=0.032)和IPI评分(P=0.047)、GCB与non-GCB亚型等(P=-0.041)指标与总生存时间(OS)呈显著负相关。用单因素生存分析瘤内和瘤周CD20+和FOXP3+细胞与OS之间的关系可见：GCB组和non-GCB组瘤内FOXP3+细胞数目与OS均呈显著负相关(P<0.05);然而值得注意的是,GCB组和non-GCB组瘤周FOXP3+细胞的数目与OS却呈显著正相关(P<0.05)。用单因素生存分析患者的结外受累(P=0.033)和分期(P=0.041)、病理亚型(P=0.045)与PFS呈显著正相关。对于FOXP3阳性细胞的预后意义,用单因素生存分析瘤内及瘤周FOXP3+细胞与PFS之间的关系均无显著相关性(P>0.05)。5、多因素预后分析： GCB与non-GCB亚型(P=0.046)、瘤内FOXP3蛋白的表达情况(P=0.029)是影响DLBCL患者OS的独立因素。6、通过RT-PCR证实DLBCL细胞系LY-3、LY-7细胞中存在不同程度FOXP3的转录。经免疫印迹实验,我们发现DLBCL细胞系LY-3、LY-7细胞中存在不同程度FOXP3蛋白的表达。其中LY-3与L-7之间FOXP3的表达差异具有统计学意义。结论FOXP3在弥漫大B细胞淋巴瘤组织中的预后意义取决于FOXP3的分布及密度。瘤内FOXP3+的肿瘤细胞数量是弥漫大B细胞淋巴瘤总生存的独立预测指标,并且与DLBCL中GCB与non-GCB分型及其预后相关,为临床提供分层的、更加个体化的预后预测和治疗方案,尤其是对于预后较差的non-GCB型弥漫大B细胞淋巴瘤的治疗提供潜在的免疫靶标。但无论是GCB还是non-GCB类型,瘤内FOXP3+的DLBCL细胞数量均与结外受累相关。提示降低DLBCL肿瘤细胞中的FOXP3的数量对于患者预后的改善可能具有更加显著的作用。