本研究通过对广西品改站种公牛站44头尼里-拉菲和33头摩拉水牛近年的精液生产数据的分析,探讨品种、气温和年龄对公牛精液品质的影响。采用DNA池PCR的方法筛选尼里-拉菲和摩拉水牛HSP70基因的SNP位点,通过HRM技术进行基因分型,研究碱基突变和公牛精液品质的相关性。进一步对摩拉和尼里-拉菲水牛中不同精子活力的精液进行顶体酶、酸性磷酸酶、α-葡萄糖苷酶活力测定和HSP60和HSP70蛋白含量定性分析,研究了 HSP70对公牛精液品质的影响,为研究HSP70在精子中的作用机制和河流型公水牛的选育提供了一定的理论基础。试验结果如下:1、结果表明,摩拉和尼里-拉菲水牛种公牛的精液在精子活力和采精量方面有显著性的差异(P<0.05),尼里-拉菲水牛的精子活力比摩拉水牛高,其采精量要低于摩拉水牛;在尼里-拉菲水牛中,3-5岁种公牛的精子密度和抗冻性能都要显著的高于6-9岁和10-16岁组公牛(P<0.05),3-5岁的种公牛的精子抗冻活力显著高于10-16岁的公牛(P<0.05),高于6-9岁的公牛但不显著(P>0.05)。摩拉水牛精液品质的年龄因素影响分析结果显示:3个年龄段水牛种公牛的精子活力、精子冻后活力和采精量都没有显著性的差异,6-9岁的种公牛精子密度和活精子数要显著高于10-16岁组(P<0.05)。从精子抗冻性方面看,10-16岁组的公牛是最低的,只有0.44,3-5岁的公牛最高,达到了 0.47,有显著性的差异(P<0.05);莫拉和尼里-拉菲水牛的精液品质在冬季(1-3月)是最差的,精子活力显著低于夏季(6-10月)和春秋季(4-5 月、11-12 月)(P<0.05)。2、在HSP70基因CDS区检测到3个SNP位点,分别是CDs区602bp位点、708bp和1284bp位点,其中602位点为有义突变,导致了甘氨酸→谷氨酸突变,另2处为无义突变。统计分析结果表明:602位点的不同基因型显著影响了摩拉和尼里-拉菲水牛的精子活力,活精子数以及精子抗冻能力(P<0.05),但对公水牛采精量和精子密度没有显著性的影响,708位点和1284位点对公牛精液品质无显著性影响(P>0.05)。3、在不同活力的摩拉和尼里-拉菲水牛精液的顶体酶、酸性磷酸酶、α-葡萄糖苷酶三种酶活力测定中,高活力组的顶体酶和α-葡萄糖苷酶显著高于低活力组的精液(P<0.05),但酸性磷酸酶与精子活力相关性不显著(P>0.05)。4、通过HSP60和HSP70蛋白的Western blotting分析,发现与低活力组相比,高活力组的HSP70蛋白要显著高于低活力组(P<0.05),其HSP60蛋白含量无显著性差异(P>0.05)。