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本文包括六个章节。从发酵培养基、摇瓶培养条件、发酵罐培养条件三个方面系统的研究了重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)的高密度发酵及放大工艺，每升发酵液中rhG-CSF的产量达到439mg。并研究了rhG-CSF的分离纯化的条件，一步疏水色谱分离纯化，使rhG-CSF的纯度从53．0％增加到97．8％，质量回收率达到24．0％。 1．重组大肠杆菌DH5α／pBV220发酵培养基的研究 在摇瓶中对工程菌DH5α／pBV220的发酵培养基进行了研究，从几种常用的细菌培养基中筛选适合工程菌DH5α／pBV220表达rhG-CSF的培养基，确定出M9培养基为基本培养基。利用单因子实验对M9培养基中的碳源和氮源种类进行了筛选，确定出适合工程菌DH5α／pBV220生长的碳源种类和氮源种类。利用正交试验筛选出工程菌生长的优化培养基配方，此培养基记为M9Ⅲ培养基。 2．重组大肠杆菌DH5α／pBV220摇瓶发酵的研究 对工程菌DH5α／pBV220在摇瓶发酵中的培养温度、发酵液pH值、溶氧、诱导时机、种子菌龄、接种量、诱导维持时间等工艺条件进行研究，确定出摇瓶发酵的最优培养条件。由实验结果得出，摇瓶培养工程菌的最优条为：温度为30℃，发酵液初始pH值为7．0～7．2，选择40％的装液量，摇床转速控制在220r左右，种子菌龄的OD600为1．5时接种为佳，选择菌体在对数生长前期(OD600=1．0)进行诱导4h可获得最佳效果。使用优化的M9Ⅲ培养基，在优化的培养条件下，摇瓶中rhG-CSF的表达量为36．5％，干重为4．45g／L。 3．重组大肠杆菌DH5α／pBV220在5L发酵罐上的间歇培养 以摇瓶发酵的研究结果为基础，在发酵罐上研究溶氧(dissolve oxygen)、诱导时机、接种量等因素对DH5α／pBV220工程菌分批发酵及补料分批发酵的影响。 首先在5L发酵罐中，对工程菌DH5α／pBV220间歇培养时，是否在培养基中添加微量元素和维生素等工艺条件进行了优化，确定出间歇培养的最优培养条件。在 SL发酵罐最优培养条件下，rhG（SF的细胞干重可达 6石…，表达量为38二％。 其次，在SL发酵罐中，从pH值、溶氧、诱导时机等方面研究了重组大肠杆菌DH5a／pBV220分批补料培养的工艺条件，确定出稳定的发酵工艺参数。在SL发酵罐中用流加方式培养重组大肠杆菌时，细胞干重可达 12卫gg／L，rhG（SF的表达量为41．9％。4．rhG（SF’的分离纯化与同时复性 在高效疏水色谱（HPHIC）条件下优化分离纯化巾G－CSF的洗脱梯度和流动相流速，实现了复性与同时纯化。经过1次色谱纯化后，rhG－CSF的纯度可达97．8％，rhG．CSF的质量口收率达到24．0％。