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口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)属于单股正链RNA病毒,感染牛、猪和不同的偶蹄动物引起口蹄疫疾病(Foot-and-mouth disease,FMD)。天然免疫系统的模式识别受体可以识别病毒感染时产生的病原相关分子。细胞溶质里RIG-I样模式识别受体(RIG-I-like receptors,RLRs)家族中视黄酸诱导基因I(retinoic acid-inducible gene I,RIG-I)和黑色素瘤分化基因5(melanoma differentiation-associated gene-5,MDA5)可识别FMDV的RNA。模式识别受体识别的病毒RNA后通过一系列的信号传导,诱导Ⅰ型干扰素(typeⅠinterferons,IFNs)的表达。Ⅰ型干扰素通过激活JAK(Janus kinase)-STAT(signal transducer and activator of transcription)信号通路,诱导干扰素下游多种抗病毒物质的产生,其随后发生天然免疫抗病毒应答。本文构建MycANXA1-pCAGGs重组质粒,并与病毒蛋白质粒、Ⅰ型干扰素信号通路相关接头分子质粒等共转染HEK293T、HeLa、BHK21和PK15等细胞,通过免疫共沉淀、激光共聚焦、Western blotting、QPCR和双荧光素酶报告系统等技术方法研究了FMDV 3A蛋白与膜联蛋白(ANXA1)相互作用及其对Ⅰ型干扰素表达的影响。结果表明:1.FMDV 3A蛋白与ANXA1相互作用,FMDV感染PK15细胞,导致内源ANXA1蛋白裂解,而SeV感染HEK-293T和Hela细胞,导致内源ANXA1表达上调,说明ANXA1参与细胞的抗病毒应答反应。2.过表达ANXA1显著抑制FMDV的复制,而下调ANXA1的表达则促进FMDV复制。3.ANXA1促进Ⅰ型干扰素的表达,而且促进SeV诱导的Ⅰ型干扰素的表达,并呈现剂量依赖性。而FMDV 3A蛋白则抑制ANXA1调控SeV诱导的Ⅰ型干扰素表达。4.ANXA1促进RIG-I、MDA5、TBK1、IRF3和IRF7诱导的IFN-β表达,但不影响VISA诱导的IFN-β表达;进一步研究发现,过表达ANXA1能提高TBK1和IRF3的磷酸化水平,敲除ANXA1基因降低TBK1和IRF3的磷酸化水平,说明ANXA1蛋白主要通过增强TBK1和IRF3的磷酸化水平来促进Ⅰ型干扰素的表达。5.ANXA1对Ⅰ型干扰素信号通路下游的多个抗病毒ISGs的表达也有影响,能明显提高细胞内RNATES、CXCL10、ISG54和ISG56的m RNA水平。本文首次证明,ANXA1通过增强FMDV诱导的TBK1和IRF3的磷酸化,促进Ⅰ型干扰素和ISGs的表达,进而抑制FMDV的复制。