位于腺嘌呤第6位氮原子上的甲基化修饰（N~6-methyladenosine,m~6A）是一种广泛分布的转录后修饰。m~6A修饰在m RNA的转录、剪接、出核转运、翻译和稳定性等生物学进程中发挥着重要的调控作用,但其对于雄性生殖细胞的调控作用尚不清楚。猪作为重要的肉用家畜与模式动物,其研究成果对于畜牧生产以及医学研究均具有重要的借鉴意义。因此,本研究通过RNA甲基化免疫共沉淀联合高通量测序（Me RIP-seq）对猪精原细胞、精母细胞与圆形精细胞进行检测,建立了猪生精细胞m RNA的m~6A修饰图谱,并利用液相色谱法-质谱联用（LC-MS/MS）、RNA干扰（RNAi）、免疫共沉淀等方法探究m~6A修饰对猪雄性生殖细胞的调控作用。本研究主要取得如下研究结果:1.通过STA-PUT沉降法分离纯化猪精原细胞、精母细胞与圆形精细胞,经形态学观察及免疫荧光染色,鉴定收取的细胞纯度达到90%以上。LC-MS/MS分析结果表明m~6A修饰在各阶段生殖细胞中水平相对稳定,约0.3%的腺苷（A）被甲基化为m~6A。2.利用MeRIP-seq结合生物信息学分析,建立了猪精原细胞、精母细胞与圆形精细胞mRNA的m~6A修饰图谱,发现m~6A修饰在猪精子发生过程中呈动态变化;m~6A高度富集于启动子、编码区与终止子;m~6A修饰分布于整个转录本,在CDS区上升,在3’UTR达到峰值;猪生殖细胞中最普遍的修饰序列为GGACU,与m~6A修饰保守序列RRACH一致。3.对相邻阶段生殖细胞差异甲基化基因与差异表达基因进行联合分析,发现m~6A修饰丰度与基因表达量正向相关,m~6A修饰动态变化与精子发生的相应生物学进程相关。与小鼠生殖细胞MeRIP-seq数据进行联合分析,发现m~6A修饰的精子发生相关基因的重合度大于非精子发生相关基因,表明m~6A修饰对精子发生的调控作用在猪与小鼠间相对保守。4.利用siRNA对m~6A甲基化酶METTL3进行基因干扰试验,发现猪精原干细胞的m~6A修饰水平下降,但增殖活性未发生显著改变。Me RIP-q PCR与qRT-PCR的结果显示METTL3缺失引起了精原干细胞命运决定相关基因SETDB1、FOXO1与FOXO3的m~6A修饰水平与表达量显著下降,证明m~6A修饰通过调控关键基因表达影响精子发生。综上,本研究建立了猪生殖细胞转录组的m~6A表观调控图谱,研究结果对于揭示m~6A修饰调控精原干细胞增殖与分化的分子机理具有重要意义,也将为其他雄性家畜生殖细胞的相关研究提供理论参考。