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本研究利用转基因棉籽成分配制培养基培养平菇,了解平菇培养过程中Bt蛋白和DNA的降解情况,了解转基因棉籽成分对平菇生长的影响,了解转基因棉籽成分对平菇酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶的影响,探索转基因棉籽成分对平菇细胞内DNA的影响,探索转基因棉籽成分对平菇主要害虫的影响,从而探索转基因棉籽在平菇栽培生态系统中的安全问题。 1、利用Envirologix试剂盒和Agdia试剂盒,测得转CryIA(c)基因棉花品种新棉99B和DP33B棉籽、棉籽仁经过一年的贮存后,Bt蛋白的含量降低一半左右;棉籽壳经过一年的贮存后,Bt蛋白的含量下降四分之一左右。 2、用棉籽配制培养料栽培平菇,利用Agdia试剂盒测定培养料中Bt蛋白的吸光值。含3%棉籽的培养料,接种平菇35天后,检测不到Bt蛋白的净吸光值;含20%棉籽的培养料,接种平菇45天后,检测不到Bt蛋白净吸光值。 3、利用巢式PCR,对培养料中来自农杆菌终止子Nos的Nos180片段进行检测。含3%棉籽的培养料中,Nos180片段残留时间可达160天;含20%和30%棉籽的培养料中,Nos180片段残留时间可达190天。 4、在培养液中过滤加入Bt蛋白、棉籽成分提取液,培养平菇菌丝体。加入的Bt蛋白、棉籽成分提取液增加,菌丝湿重增加。不同品种转基因棉籽对平菇菌丝体生长的影响,有正面的,也有负面的。不同品种平菇在含转CryIA(c)基因棉花品种中30及其亲本棉品种中16棉籽成分提取液的培养液中,有的生长特性有差异。含有转基因棉籽、非转基因棉籽的培养料,不影响菌丝长势、菌丝满袋时间和菇蕾开始形成时间。 5、利用不同含量、不同品种棉籽配制的培养料栽培的平菇子实体,3%棉籽含量时同工酶酶谱没有差异,20%、30%棉籽含量时同工酶酶谱则出现差异。利用不同棉籽成分提取液配制的培养液培养的平菇菌丝体,有的同工酶酶谱存在差异。利用中16、中30棉籽成分提取液配制的培养液培养的不同品种平菇菌丝体,有的同工酶酶谱存在差异。含转基因棉籽及亲本棉棉籽成分的培养基培养的平菇子实体和菌丝体,棉籽成分含量高时其同工酶酶谱存在差异。 6、利用PCR方法,在平菇菌种中检测到了和花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子序列一致的35S165、35S195、35S205片段,而检测不到35S101、35S162、35S273片段;有的检测到了和农杆菌终止子Nos序列一致的Nos180核酸片段,但检测不到Nos165片段;利用转基因棉籽成分提取液配制的培养液培养的平菇(5.511和美国平菇)菌丝体,利用转基因棉籽配制的培养料栽培的平菇(P40)子实体中,均没有检测到外源Nos165、Nos180核酸片段。 7、DNA马铃薯葡萄糖培养液(DPD)、中16棉籽成分提取液马铃薯葡萄糖培养液(C16PD)、中30棉籽成分提取液马铃薯葡萄糖培养液(C30PD)中连续传代9代的菌丝体,DNA马铃薯葡萄糖琼脂(DPDA)、中16棉籽成分提取液马铃薯葡萄糖琼脂(C16PDA)、中30棉籽成分提取液马铃薯葡萄糖琼脂(C30PDA)上连续传代10代的菌丝体,转基因棉籽和非转基因棉籽配制的培养料上栽培的平菇子实体,利用200条随机引物进行RAPD分析,没有发现稳定的差异。 8、利用中30棉籽及其亲本中16棉籽配制的菌棒,在菇棚中自然感虫,观察平菇厉眼菌蚊的发