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1.研究背景和目的中国食管癌高发区流行特征之一是食管鳞癌和贲门腺癌同时高发,提示二者可能存在共同或相似的环境致病影响因素或内在的遗传易感基因。在食管癌高发区,同一个体同时或先后发生原发性食管鳞癌和贲门腺癌的病例并非罕见,我们称之为食管/贲门双源癌（简称双源癌）。双源癌这一独特的发病模型非常有助于揭示影响食管鳞癌和贲门腺癌发生的环境和遗传独立因素及其交互作用在双源癌发生和发展中的作用机制。本研究旨在利用本实验室长期积累的50万例食管癌和贲门癌临床诊疗、病理和随访信息大数据库中的食管/贲门双源癌患者数据库和生物样品库,采用临床流行病学方法,探讨食管/贲门双源癌的临床病理特征及生存影响因素;利用全基因组外显子测序（Whole Exome Sequencing,WES）等方法,初步揭示同一个体食管鳞癌和贲门腺癌组学特征谱及其差异,进一步甄别食管鳞癌和贲门腺癌关键致病基因,为我国食管癌高发区食管癌和贲门癌高危人群筛查、早期诊断和靶向治疗等精准医疗提供候选分子靶标。2.材料与方法2.1资料来源172,225例病例来源于河南省食管癌重点开放实验室50万例食管癌及贲门癌临床信息数据库,时间跨度为1974年～2016年;其中,男性11,361例,女性7,635例,平均诊断年龄59.32±8.68岁,中位年龄60岁。2.1.1双源癌患者入选条件从实验室EXCEL电子信息库中,按照以下入选条件:1)均为食管鳞癌和贲门腺癌根治术患者;2)患者基本信息完整,包括诊断年龄、居住地址、联系电话和联系人等;3)均有术后完整临床病理记录,包括TNM分期、分化程度等;4)均有详细临床诊疗信息;5)同时发生食管鳞癌和贲门腺癌。最终筛选出172,225例符合条件的食管鳞癌和贲门腺癌。2.1.2食管和贲门双癌前病变入选条件入选条件:入选双源癌的病例中术后病理信息中同时包含有鳞状上皮和腺上皮描述的病例。按此标准入选455例。2.1.3全基因组外显子测序用双源癌入选条件入选条件:1)均有食管鳞癌、贲门腺癌根治手术切除标本及其癌旁组织;2)具有详细临床诊疗信息和病理信息;3)近5年内的双源癌患者;4)术前均未接受任何剂量的放疗和化疗。按照以上标准共挑选出21例符合要求的双源癌组织标本。2.2研究方法2.2.1临床流行病学统计分析卡方检验,K-M生存分析等2.2.2全基因组外显子测序、目标基因外显子测序、免疫组化。全基因组外显子测序（WES）:用DNA提取试剂盒提取食管癌组织、贲门癌组织、食管癌旁正常上皮组织、贲门癌旁正常上皮组织DNA（Qiagen,德国）。经质检合格后,建立DNA文库,再进行文库质检,然后采用二代测序平台Hi Seq4000进行全基因组外显子上机测序。采用标准化流程比对分析数据,最终筛选出与食管鳞癌与贲门腺癌癌变相关的高频突变基因。3.结果3.1食管/贲门双源癌临床流行病学特征在共计172,225例食管鳞癌和贲门腺癌大资料库中,食管鳞癌患者137,780例,占80%,贲门腺癌34,445例,占20%。共筛选出同时患食管鳞癌/贲门腺癌双源癌患者共1392例,其发生率占食管鳞癌和贲门腺癌患者总数的0.81%。其中男性患者1,103例,平均年龄63±10岁,女性患者289例,平均年龄62±9岁。食管鳞癌/贲门腺癌双源癌患者男女比例为3.8:1,低于单发食管癌患者男女性别比1.8:1（χ2=1.45,P＜0.05）,与单发贲门腺癌患者男女比例3.4:1差别不大（χ2=1.25,P=0.226）。该地区食管鳞癌、贲门腺癌和食管鳞癌/贲门腺癌双源癌高发年龄段为50-70岁,分别占总例数的71%,70%,74%（P=0.19）。3.2食管/贲门双源癌癌前病变临床流行病学特征在455例食管下段鳞癌手术切除后包含贲门腺上皮的病例中,食管鳞状上皮不典型增生63例（13.8%）;贲门腺上皮不典型增生143例（31.4）;食管鳞状上皮不典型增生和贲门腺上皮不典型增生同时发生在同一个患者共29例,占6.3%;其中有5例为食管鳞癌/贲门腺癌双源癌,占1.1%。3.3食管/贲门双源癌全基因组外显子测序、目标基因测序分析结果及P53蛋白、CDH1蛋白表达与食管鳞癌和贲门腺癌生存预后关系。全基因组外显子测序初步筛选出47个食管鳞癌高频突变基因,83个贲门腺癌高频突变基因。在400例单发贲门腺癌及51例单发食管鳞癌组织中进行靶基因测序验证,最终得到12个贲门腺癌高频突变基因,包括TP53、G1、G2、G3、G4、G5、G6、G7、G8、G9、G10和G11,1个食管鳞癌高频突变基因:TP53;P53蛋白在食管鳞癌和贲门腺癌组织中阳性表达率分别为:56%、57%,且与食管鳞癌患者生存预后呈负相关;CDH1蛋白在食管鳞癌和贲门腺癌组织中阳性表达率分别为:82%、86%,且与食管鳞癌患者生存预后呈负相关。4.结论4.1食管鳞癌/贲门腺癌双源癌在食管癌高发区总体的发生率为1.9%,其癌前病变发生率为6.3%。4.2利用全基因组外显子测序技术发现12个贲门腺癌高频突变基因,1个食管鳞癌高频突变基因;4.3 P53蛋白、CDH1蛋白表达均与食管鳞癌生存预后呈负相关。