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目的：人肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是常见的恶性肿瘤之一,持续的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染和HCC的发生之间的相关性已受到广泛的重视,HCC是慢性HBV感染的终末阶段。树突状细胞(dendritic cell, DC)是目前所知的机体内功能最强的抗原提呈细胞(antigen presenting cell, APC),基于树突状细胞的肿瘤疫苗(dendritic cells-based tumor vaccine)已经试用于肝癌的治疗,但它的制备,特别是抗原负载的方法仍是肝癌的树突状细胞疫苗研究的主攻方向。本实验探讨了榄香烯复合瘤苗联合乙肝表面抗原共负载诱导制备树突状细胞瘤苗的方法与体外诱导抗肝癌效应。方法和结果：1.树突状细胞的培养：从正常献血者外周血中分离单个核细胞,采用培养黏附法获得富含CD14+T细胞的细胞悬液,加入重组细胞因子rhGM-CSF、rhIL-4(使其终浓度rhGM-CSF 20ng/ml、rhIL-4 20ng/ml),置37℃、5%CO2培养箱内培养,第6天收集疏松黏附于培养板底的聚集体及悬浮的细胞,流式细胞仪检测表明CD83阳性率为43.84%,HLA-DR表达率为76.46%,富含树突状细胞,备用。2.抗原负载：用榄香烯联合丝裂霉素C处理人肝癌细胞SMMC-7721制备榄香烯复合瘤苗(EC-TCV),采用反复冻融的方法制备榄香烯复合瘤苗细胞溶解物,作为粗制榄香烯复合瘤苗抗原。用榄香烯复合瘤苗抗原、乙肝疫苗单独或联合冲激GM-CSF与IL-4联合诱导的树突状细胞。流式细胞仪检测表明CD83阳性率增加,分别为57%、61.01%和80.69%。HLA-DR表达率变化不大。3.异体混合淋巴细胞反应(allogeneic mixed lymphocyte reaction,MLR)：用树突状细胞作为刺激细胞,用正常异体非黏附细胞作为反应细胞,于37℃、5%CO2培养箱培养72h后,MTT法测各孔在570nm波长下的OD值。结果表明用榄香烯复合瘤苗抗原、乙肝疫苗单独或联合冲激的树突状细胞具有刺激异体淋巴细胞增殖的能力,增殖指数1.6580±0.0789、1.4457±0.0802和1.8473±0.0853,统计结果显示各组与对照组均有明显差(P<0.05)。4.对肝癌细胞SMMC.7721的杀伤作用：将各种树突状细胞瘤苗活化后的淋巴细胞作为效应细胞,肝癌细胞株SMMC.7721作为靶细胞,用MTT法测杀伤率。结果表明经不同处理树突状细胞刺激过的淋巴细胞对肝癌细胞SMMC.7721都有杀伤活性,分别为32.89±4.07%、42.76±3.24%和51.7 1±2.76,未负载任何抗原的对照树突状细胞作为刺激细胞细胞毒活性为20.04±4.24%。统计结果显示各实验组与对照组均有明显差异(P<0.05)。结论：采用榄香烯复合瘤苗抗原和乙肝疫苗联合负载所诱导的树突状细胞具有典型的树突状细胞的形态学特征、能够刺激同种异体淋巴细胞增殖和介导细胞毒效应。本研究结果所建立的树突状细胞可用于肝癌的免疫治疗。