涎腺肿瘤是常见的口腔颌面部疾病，是口腔颌面部特有一大类的肿瘤。涎腺腺样囊性癌(salivary gland adenoid cystic carcinoma，SACC)足口腔颌面部常见的恶性肿瘤之一，易早期出现远处转移，目前针对原发灶主要的治疗手段是手术及放疗，但由于面神经的存在，常出现复发；对早期即易远处转移的机制尚未明了，亦无有效的治疗手段。 癌的发生、发展、转移是一个多因素、多阶段、复杂渐进的过程，干预或终止其中某个或多个相关因素或过程，能够改变癌发生、发展、转移的进程，达到化学预防和治疗的目的。针对肿瘤生长及转移相关因子，在基因水平进行干预，是恶性肿瘤的基因治疗策略。 Ezrin蛋白作为膜与细胞骨架连接蛋白，在多种肿瘤中呈高表达，已证实与CD44、E-cadherin等多种细胞表面分子及酪氨酪氨酸激酶受体、Rho、激肽原酶(PKA)等信号转导系统相联系，可能通过调控细胞黏附分子(cell adhesion molecule,CAM)和参与肿瘤细胞信号转导等方式，在肿瘤的增殖、侵袭、转移中发挥重要的作用。 CD44v6即细胞表面黏附分子CD44变异型6，是细胞与细胞、细胞与细胞外基质相互识别和作用的分子基础，可介导黏附作用以及参与MEK/ERK等信号转导途径，在恶性肿瘤的发生、发展中具有重要作用。 NO在体内参与一系列生理、病理的过程，NO与其主要合成酶一诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在肿瘤发生、发展及转移中有很多分子机制发挥作用，如促进肿瘤血管生成、抑制细胞凋亡等。头颈部肿瘤中iNOS的表达明显升高，参与肿瘤新血管形成，促进肿瘤的发生、发展、浸润及转移。 RNA干扰(RNA interference，RNAi)是特异性基因表达沉默的强有力手段之一，是双链RNA介导的转录后基因沉默，广泛存在真核牛物中。RNAi具有高度特异性、高效率、放大效应并可遗传的特点。因此针对肿瘤相关基因在肿瘤细胞内引发RNAi效应，将可能开辟肿瘤基因治疗的新途径。 目的： 本研究以人涎腺常见良恶性肿瘤组织和腺样囊性癌肺高转移细胞株ACC-M为研究对象，检测Ezrin、CD44v6及iNOS在涎腺良恶性肿瘤中的表达，初步探讨Ezrin蛋白、CD44v6及iNOS在涎腺肿瘤浸润性生长和转移等生物学行为中的作用机理；进一步探讨以RNA干扰技术沉默Ezrin基因对ACC-M细胞Ezrin、CD44v6及iNOS表达以及细胞增殖、侵袭、运动能力的影响。 第一部分涎腺良恶性肿瘤中Ezrin、CD44v6及iNOS的表达和意义 材料： 选取1998年1月至2007年12月我科手术切除、病理科保存的部分涎腺肿瘤石蜡包埋组织标本，其中包括多形性腺瘤40例，黏液表皮样癌51例，腺样囊性癌43例；选取同期15例手术切除的正常涎腺组织作为对照。选取2006年3月至2007年9月手术切除的部分新鲜涎腺肿瘤组织及正常涎腺组织，其中包括多形性腺瘤12例，黏液表皮样癌7例，腺样囊性癌6例，正常涎腺组织5例。病变发生于腮腺、颌下腺、舌下腺及上腭、舌根、颊部、口底的小涎腺。 方法： 采用免疫组织化学SP法对石蜡标本进行检测，逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)对液氮保存的新鲜标本进行检测。采用x2检验或精确概率检验法比较两组或多组之间阳性率的差别；分别采用t检验或单因素方差分析进行两组与多组之间样本均数的比较。所有资料利用SPSS13.0统计软件包进行统计分析。取双侧a=0.05水平，以p<0.05为差异具有统计学意义。 结果： 石蜡标本结果： 1、Ezrin、CD44v6、iNOS在正常涎腺组织主要表达于导管上皮细胞胞浆和/或胞膜，偶见于腺泡细胞；Ezrin、iNOS在肿瘤组织中均表达于肿瘤细胞胞浆，CD44v6表达于肿瘤细胞胞膜。 2、Ezrin在正常涎腺组织、多形性腺瘤、黏液表皮样癌、腺样囊性癌中的表达阳性率分别为26.67％、57.50％、92.16％、86.05％，CD44v6表达阳性率在四组分别为0.00％、57.50％、62.75％、60.47％，iNOS阳性率在四组中分别为13.33％、47.50％、88.24％、74.42％。 3、涎腺恶性肿瘤(腺样囊性癌和黏液表皮样癌)Ezrin、iNOS表达的阳性率高于多形性腺瘤，多形性腺瘤高于正常涎腺组织，各组间Ezrin、iNOS表达的阳性率差异有统计学意义。CD44v6在涎腺肿瘤中的表达高于正常涎腺组织，有统计学意义，而在三组涎腺肿瘤中的阳性率差异无统计学意义。 新鲜标本结果： Ezrin、iNOS基因的mRNA在正常涎腺组织、涎腺多形性腺瘤、涎腺恶性肿瘤(黏液表皮样癌和腺样囊性癌)中的表达差异有统计学意义；CD44v6基因的mRNA在正常涎腺组织和涎腺肿瘤间表达有差异，而各组肿瘤之间的差异无统计学意义。 第二部分沉默Ezrin基因对涎腺腺样囊性癌细胞Ezrin、CD44v6、iNOS表达及癌细胞增殖、侵袭、运动能力的影响 主要研究方法和结果： 根据siRNA设计原则，设计针对Ezrin基因的siRNA，予以化学合成，应用脂质体LIPOFECTAMINE 2000介导转染涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞ACC-M，并设置阴性对照组和空白对照组。用免疫细胞化学、MTT法、流式细胞术、Transwell膜侵袭实验及RT-PCR分别检测各组细胞。免疫细胞化学显示Ezrin、CD44v6蛋白表达降低，iNOS表达降低不明显；绘制细胞牛长曲线，显示转染特异性Ezrin基因siRNA片断后，细胞生长受抑制明显；流式细胞仪检测发现沉默Ezrin基因后，细胞凋亡明显增加；Transwell膜侵袭显示转染Ezrin基因siRNA片断后，细胞侵袭、运动能力明显降低；RT-PCR检测Ezrin基因沉默ACC-M后Ezrin、CD44v6及iNOS基因表达，结果显示基因沉默后Ezrin基因表达下调明显，且CD44v6基因表达也随之下调，iNOS表达降低不明显。 结论： 1.Ezrin可能通过调节CD44v6的表达协同iNOS诱导生成NO的作用使不同的涎腺肿瘤恶性潜能及侵袭、转移能力不同。Ezrin、CD44v6和iNOS可望成为衡量涎腺肿瘤恶性转化、侵袭、转移潜能的重要指标，并可作为涎腺肿瘤预后判断的重要参考。 2.腺样囊性癌肺高转移细胞株ACC-M中Ezrin、CD44v6及iNOS高表达。 3.通过RNAi可以降低ACC-M中Ezrin的表达，达到基因沉默的效果。 4.RNAi沉默Ezrin基因可促进ACC-M的凋亡，并降低其增殖活性。 5.RNAi沉默Ezrin基因可使ACC-M侵袭、运动能力下降。 6.Ezrin基因沉默可以降ACC-M中CD44v6的表达水平。