低强度激光对TNF-α引起的NIH3T3细胞时钟基因表达抑制的影响

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肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor α,TNF-α)是一种多效能的炎症细胞因子,在很多疾病的发生中扮演着重要作用。在感染和一些自身免疫疾病中,TNF-α水平较正常水平显著升高并伴有发热、疲劳和睡眠紊乱等疾病行为综合症。因为昼夜节律时钟系统的的紊乱是造成睡眠紊乱的分子基础。因此,这种由TNF-α引起的睡眠紊乱可能与昼夜节律时钟系统的调控紊乱相关,在研究这种关联时,有人发现TNF-α能够显著抑制NIH3T3细胞时钟基因的表达,影响时钟基因的表达水平,但却不改变时钟基因表达的时相。因此推测这种由TNF-α引起的时钟基因表达抑制作用可能是引发上述症状的分子基础。与此同时,有越来越多的实验证据表明低强度激光具有广泛的光生物调节作用,其中包括能够调节炎症因子TNF-α水平的作用。在本实验研究中我们利用低强度激光照射处理该细胞模型,探讨低强度81Onm激光照射是否对TNF-α引起的NIH3T3细胞时钟基因表达抑制产生影响,为低强度8lOnm激光照射是否适合作为一种对抗TNF-α副作用的手段用于临床治疗提供理论依据。 本文利用高浓度马血清休克处理体外培养的NIH3T3细胞2h,以诱导(或同步化)时钟基因的表达并使其表达呈现昼夜节律性振荡方式,并将开始处理细胞时刻记为O时刻。然后将细胞置于含TNF-α的终浓度为10 ng.mL-l的无血清培养液中培养,压抑时钟基因的表达水平,产生时钟基因表达受抑细胞模型。采用不同的光照强度与照射时间的组合,在培养基由含高浓度马血清的培养基置换为仅含TNF-α的无血清培养基后,立刻予以低强度810 nm激光照射处理。 以实验Oh为起始时间点,在第24 h收取细胞样品,利用半定量RT-PCR检测光照组与对照组同一时间点时钟基因mRNA的表达水平,比较两者的差异。 结果表明,在TNF-α开始作用于细胞时,利用低强度810 nm激光照射处理细胞,可以明显改变由TNF-α引起的时钟基因表达受抑现象,使有关时钟基因及钟控基因的表达发生改变。 由此得出结论:TNF-α对NIH3T3细胞时钟基因表达水平的压抑作用可以为TNF-α开始作用时施加的低强度810 nm激光照射处理所改变。为寻找一种新的体外抑制TNF-α副作用的治疗手段提供了理论依据。
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