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ATP生物发光法具有反应快速、操作简便等优点,已应用于食品细菌总数检测。但是该法存在灵敏度不高、试剂不耐储存导致测定结果不稳定等缺点,使其在食品安全、医疗卫生、环境监控等领域中的应用受到限制。针对上述缺点,本文通过单因素试验、双因素优选试验优化了ATP生物发光反应条件,建立了ATP生物发光检测新技术。根据萤火虫荧光素酶的结构特点和性质,对ATP生物发光反应中酶的稳定性进行研究,研制出新型酶保护剂,提高了ATP生物发光检测技术的稳定性和灵敏度。在提取剂的筛选、提取剂浓度及提取时间的确定过程中,将ATP生物发光法和平板计数法进行协同研究,得出了一致的结论。将优化的ATP生物发光法应用于各类食品（液体、固体、熟食、生鲜品）中细菌总数的检测,确定了该方法在食品中应用的可行性。主要研究结果如下:（1）ATP生物发光反应条件的优化:确定了FL浓度为53mg/L、Ln浓度为80mg/L为最佳的酶与底物浓度组合,Mg2+的最适作用浓度为0.25mM,反应体系最优化pH值为7.2,温度为23℃。（2）萤火虫荧光素酶稳定性研究:确定了BSA、酪蛋白钠盐、正辛酸钠与Tris缓冲液的组合剂在一定程度上能提高酶的稳定性和检测方法的灵敏性,实现了荧光素酶由只能在冷冻条件下保存转至可在25℃保存的变化,且4℃下保存时间可延至7d,酶活保存率高达85.99%。（3）ATP提取方法研究:通过对细胞内多种ATP提取剂的筛选研究,确定了CTAB为最佳的细菌细胞ATP提取剂。CTAB的最适作用浓度为0.015%,最佳提取时间为3min,提取过程中添加0.25%的β-CD有助于提高ATP生物发光法的准确性和灵敏度。（4）方法的考核:优化的方法检出限高达单个细菌,批内变异和批间变异分别小于7%和8%,重现性分析RSD为4.0%,ATP加标回收率范围为82.2%112.4%,表明建立的ATP生物发光法准确可靠。将优化的ATP生物发光法应用于苹果汁、面粉、熟肉制品、鱼肉中细菌总数的检测,同时与平板计数法测定结果比较具有良好的相关性（ R2> 0.96）。