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近年来乳腺癌的发病率明显上升,并趋于年轻化。乳腺癌的治疗主要包括手术、化疗、放疗和内分泌治疗,其中化疗是治疗乳腺癌的重要治疗手段。多种结构不同作用机制不同的抗癌药物,能在短期内缓解乳腺癌的病情发展;但是对于化疗药物所产生的原发性耐药和初次化疗后产生的多药耐药,使得乳腺癌的治疗十分棘手。多药耐药的产生是化疗失败的主要原因,也是化疗的最大障碍。目前对于逆转肿瘤多药耐药的研究是抗肿瘤药物发现的一个重要组成部分。本课题在前期研究的基础上,探讨新藤黄酸对人乳腺癌细胞多药耐药的逆转作用及其相关机制的研究,为将新藤黄酸开发为一种具有良好抗肿瘤作用的临床用药提供相应的理论基础。目的:研究新藤黄酸逆转人乳腺癌细胞多药耐药的作用与相关机制。方法:采用MTT法检测新藤黄酸和阿霉素对MCF-7/ADR细胞和MCF-7细胞增殖的影响;阿霉素联合低剂量新藤黄酸(IC10以下)对MCF-7/ADR细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测MCF-7/ADR细胞与MCF-7细胞内阿霉素的积累;采用流式细胞仪检测新藤黄酸对MCF-7/ADR细胞内阿霉素和罗丹明123积累的影响;采用流式细胞仪检测新藤黄酸对MCF-7/ADR细胞内罗丹明123外排的影响;流式细胞仪检测新藤黄酸对MCF-7/ADR细胞周期的影响;流式细胞仪检测新藤黄酸对MCF-7/ADR细胞内P-g P蛋白的影响;Western blot法检测用新藤黄酸处理MCF-7/ADR细胞后P-g P蛋白,PTEN蛋白,P-PI3K蛋白,p-Akt蛋白表达量的变化。结果:(1)ADR作用MCF-7/ADR细胞48h的IC50为80.22μM。当ADR联合低浓度GNA(IC10以下)作用于MCF-7/ADR细胞时,ADR对MCF-7/ADR细胞的IC50明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。当GNA浓度1μM时,作用48 h的IC50为50.97μM,逆转系数为1.57;当GNA浓度2μM时,逆转作用非常明显,作用48 h的IC50为27.29μM。逆转系数为2.94;当GNA浓度4μM时,逆转作用非常明显,作用48 h的IC50为12.54μM,逆转系数为6.40。(2)在MCF-7和MCF-7/ADR细胞中分别加入ADR,通过流式细胞仪检测,结果表明MCF-7细胞中ADR含量明显多于MCF-7/ADR细胞中(P<0.01)。(3)新藤黄酸处理细胞后,MCF-7/ADR细胞内荧光明显增强,提示新藤黄可能增加MCF-7/ADR细胞内阿霉素和罗丹明123的积累。(4)在罗丹明123外排实验中,未加药之前,30 min后、60 min后、2 h后,MCF-7/ADR细胞内罗丹明123水平有降低趋势;新藤黄酸作用后,30 min、60 min、2 h后,MCF-7/ADR细胞内罗丹明123的外排被抑制,结果表明GNA能够抑制P-g P的泵出作用。(5)PI单染流式细胞仪检测结果显示,随着GNA浓度的增加,G0/G1期的细胞数也随着增加,S期的细胞数变化不大,G2/M期的细胞数明显减少。(6)不同浓度的新藤黄酸作用MCF-7/ADR细胞后,P-g P的表达量随着GNA浓度的增大而减少,且呈剂量依赖性。(7)Western blot检测结果显示,GNA下调了PTEN蛋白,下调了p-PI3K和p-Akt的表达,并且下调了P-g P蛋白的表达。结论:GNA逆转人乳腺多药耐药MCF-7/ADR细胞,其可能机制是通过抑制了PTEN/PI3K/Akt信号通路,并通过抑制了P-g P的表达,逆转了人乳腺多药耐药MCF-7/ADR细胞的耐药作用。