纳米二氧化硅与苯并[a]芘单独或联合对TNFα-TNFR信号通路影响的研究

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wenlimm
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[目的]探讨经纳米二氧化硅及苯并[a]芘单独或联合对BEAS-2B、A549及YTMLC三种细胞进行染毒后,TNF-α—TNFR信号通路表达水平的改变。[方法](1)结晶紫法测定纳米二氧化硅及苯并[a]芘对三种细胞系各自的半数致死量; (2)纳米二氧化硅及苯并[a]芘单独或联合对BEAS-2B、A549、 YTMLC三种细胞染毒12h、24h及48h后RIPA法提取细胞蛋白,超微量分光光度计测定蛋白浓度,拟合标准曲线;(3) western blot法检测三种细胞系三个时间点中Caspase3、Caspase8、NF-κB、P100/P52、P105/P50、TNFα等关键蛋白的表达变化情况。(4)用SPSS 20.0进行数据结果统计分析。[结果](1)纳米二氧化硅对BEAS-2B半数致死浓度为71.400±0.785mg/L,对A549半数致死浓度为72.452±0.538 mg/L,对YTMLC细胞半数致死浓度为70.110±0.329 mg/L,苯并[a]芘对BEAS-2B半数致死浓度为7.623±0.443μ mol/L,对A549半数致死浓度为7.623±0.726μ mol/L,对YTMLC细胞半数致死浓度为8.521±0.811μmol/L。(2) BEAS-2B细胞系:与对照组相比,12h时单独组及联合组TNF-a表达量升高,联合组与单独组无明显差异,各组间Caspase3、 Caspase8、P100表达量无明显差异;与对照组相比,24h时单独组及联合组TNF-α、caspase3、caspase8的表达量均有上升,与单独组相比,联合组TNF-α、caspase3、 caspase8、P100的表达量上升;与单独组及对照组相比,联合组caspase3、 caspase8、P100表达量严重下降(几乎不表达),TNF-a表达量上升;(3)A549细胞系:与对照组及单独组相比,12h时联合组P100、caspase8、TNF-α表达量略有升高,caspas3表达量略低;对照组及单独组相比,24h时联合组caspas3、 TNF-α表达量升高,各组间P100、caspase8未见明显差异;与对照组及单独组比较,48h时联合组caspase8, P100表达量降低,各组间caspase3及TNF-a表达量未见明显差异;(4) YTMLC细胞系:与对照组相比,联合组及单独组12h时caspase8及TNF-α表达量降低,caspase3表达量升高,各组间P100表达量未见明显差异;与对照组及单独组比较,24h时联合组caspase8, caspase3,P100, TNF-α表达量升高;与单独组及对照组比较,48h时联合组TNF-α及caspase8表达量较低,caspase3表达量较高:与对照组比较,单独组及联合组P100表达量升高。[结论]1.纳米二氧化硅及苯并[a]芘联合作用较单独作用的细胞毒性更强,这可能是导致纳米二氧化硅及苯并[a]芘联合作用使细胞具有更强癌变倾向的重要因素之一;2.纳米二氧化硅及苯并[a]芘联合作用可以引起细胞TNFα-TNFR信号通路中关键蛋白的异常表达,TNFα-TNFR信号通路可能是纳米二氧化硅及苯并[a]芘联合使支气管上皮细胞发生癌变的重要途径之一。
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