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胚胎干细胞是一种高度未分化的细胞。诱导多能干细胞指的是将细胞进行重编程,转化为具有胚胎干细胞特性和功能的多能干细胞。在哺乳动物中,遗传物质通过生殖细胞传递给后代,从而使物种得到延续。胚胎在发育的早期就已经形成两类细胞:体细胞和生殖细胞。最先形成的生殖细胞是原始生殖细胞,它是精子和卵子的前体细胞。在雄性动物的体内,原始生殖细胞随着个体的发育逐渐分化为精原干细胞。精原干细胞最终形成精子。本实验主要分为三个部分:1、将小鼠的诱导多能干细胞体外培养,分化为小鼠原始生殖细胞。首先,将小鼠诱导多能干细胞在有饲养层体系下培养。当细胞状态稳定后,将其转入无饲养层的体系培养。对小鼠诱导多能干细胞的多能性进行免疫荧光分析,主要检测:OCT4,NANOG和SSEA1。当细胞状态稳定后,将其诱导分化为小鼠外胚层干细胞,然后再将状态较好的小鼠外胚层干细胞诱导分化为原始生殖细胞。最后通过免疫荧光分析对其进行鉴定,主要检测:OCT4和Blimp1。2、将猴的胚胎干细胞诱导分化为原始生殖细胞。首先,将猴的胚胎干细胞体外培养。对猴胚胎干细胞的多能性进行免疫荧光分析,主要检测:OCT4,SOX2,SSEA4和TRA-1-81。当细胞状态稳定时,开始将其诱导分化为猴na(?)ve态胚胎干细胞。对猴na(?)ve态胚胎干细胞的多能性进行免疫荧光分析,主要检测:OCT4,SOX2,TRA-1-60和TRA-1-81。猴na(?)ve态胚胎干细胞状态稳定后,再将其诱导为原始生殖细胞。最后通过免疫荧光分析对其进行鉴定,主要检测:OCT4,Blimp1和SOX17。3、对猴睾丸体内的精原干细胞进行鉴定。将猴的睾丸取下,制作成石蜡包埋块。将睾丸包埋块制作成切片。最后通过免疫荧光分析对其进行鉴定,主要检测:GFRα1,Thy1,和VASA。通过体外培养,将小鼠诱导多能干细胞诱导为外胚层干细胞,并将其进一步诱导培养获得了小鼠原始生殖细胞。通过体外培养,将猴胚胎干细胞诱导为na(?)ve态胚胎干细胞,并将其进一步诱导培养获得了猴原始生殖细胞。通过GFRα1,Thy1,和VASA鉴定到猴睾丸内的精原干细胞。