目的：胎膜早破（Premature rupture of membranes PROM）是产科的一常见并发症，严重困扰母儿健康。近年来发病率有逐渐增加的趋势。因此，寻找PROM的病因，降低围产儿的发病率和死亡率成为当今产科领域的研究热点之一。本研究旨在从感染角度探讨酶和细胞因子对PROM的影响。利用免疫组化方法检测基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinases MMP-9）及其抑制剂-1（tissue inhibitor matrix metalloproteinases TIMP-1）在胎膜组织中的表达。利用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测孕妇血清中IL-6、IL-8的水平，并探讨MMP-9与IL-6、IL-8是否有相关性，从而为寻找PROM的病因提供新思路，为临床治疗提供理论依据。 方法：资料来源：选取2002.8月-2002.12月在河北医科大学第二医院产科病房住院分娩孕妇共58例，分为三组：Ⅰ组：21例，为足月PROM患者，平均年龄27±2岁，平均孕周为38±1.5周，其中Ⅰ1组8例，为合并绒毛膜羊膜炎；Ⅰ2组13例，为无绒毛膜羊膜炎。Ⅱ组：17例，为未足月PROM患者，平均年龄28±1岁,平均孕周为33±2.3周，其中Ⅱ1组7例，为合并绒毛膜羊膜炎；Ⅱ2组10例，为无绒毛膜羊膜炎。Ⅲ组：20例，均为正常足月分娩患者,平均年龄28±2岁，平均孕周39±1.2周。所有受试对象均为临产前要求剖宫产。所有孕妇<WP=4>均为第一胎、单胎、头位、无头盆不称、羊水过多等，无其他妊娠合并症及并发症,无内外科疾病。所有孕妇年龄、孕产次、营养状况、社会地位、经济收入等均相似，具有可比性。所有受试对象均于临产前无宫缩时抽取肘静脉血3ml，分离血清，-70℃冰箱保存集中待检。取胎膜破口处的胎膜2cm×2cm×0.5cm大小，生理盐水洗净表面血迹，立即用10%中性福尔马林固定，石蜡包埋。酶联免疫吸附实验检测血清中IL-6、IL-8的水平，步骤如下：（1）将标准品分别稀释成1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、0pg/ml. （2）将已平衡至室温的密封袋中取出抗体包被板条。（3）除空白孔外，分别将标本和不同浓度标准品（100ul/孔）加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，37℃孵箱孵育60min。（4）洗板4次。（5）除空白孔外，加生物素化抗体工作液100ul/孔，用封板胶纸封住反应孔，37℃孵箱孵育60min。（6）洗板4次。（7）除空白孔外，加酶结合工作液100ul/孔，用封板胶纸封住反应孔，37℃孵箱孵育30min。（8）洗板4次。（9）加入显色剂100ul/孔，37℃，避光，孵箱孵育12min。（10）加入终止液100ul/孔，混合后用酶标光度仪在波长为450nm处测每孔的吸光度（A）值。各标本石蜡切片行HE染色，在光镜下观察胎膜组织的结构变化及有无绒毛膜羊膜炎。利用免疫组化SP法检测各组胎膜MMP-9和TIMP-1的表达情况。步骤如下：（1）石蜡切片脱蜡至水。（2）3%H2O2室温孵育10分钟，消除内源性过氧化物酶的活性。（3）蒸馏水冲洗5分钟，0.01PBS冲洗， 5分钟×3次。（4）微波抗原修复：切片置枸橼酸缓冲液中加热使液体<WP=5>温度保持在92-98℃，修复15分钟。（5）室温自然冷却25℃以下，0.01PBS冲洗，5分钟×3次。（6）正常山羊血清封闭，室温孵育10分钟。倾去，勿洗。滴加一抗，4℃冰箱过夜。（7）0.01PBS冲洗，5分钟×3次。（8）滴加生物素标记二抗，37℃孵育30分钟。（9）滴加辣根过氧化物酶标记链霉卵白素，37℃孵育30分钟。（10）0.01PBS冲洗，5分钟×3次。（11）DAB显色：MMP-9显色3分钟，TIMP-1显色2分钟。（12）自来水终止显色，并充分冲洗，苏木素复染5分钟，盐酸酒精分化20秒，酒精脱水，二甲苯透明，树胶封片后镜下观察。 结果：（一）组织学观察：通过观察HE染色的胎膜早破组织切片结果如下：所有PROM胎膜标本，感染者占40.54%，未感染者占59.46%，tPROM患者中胎膜感染占38.09%，其中中重度绒毛膜羊膜炎仅1例占4.7%,轻度绒毛膜羊膜炎7例占33.3%。pPROM患者中胎膜感染占41.18%，其中中重度绒毛膜羊膜炎2例占11.8%,轻度绒毛膜羊膜炎5例占29.4%。感染的胎膜组织中炎细胞浸润以中性粒细胞为主，轻度绒毛膜羊膜炎者，炎细胞较少，分散分布于绒毛膜的假基底膜下和滋养层细胞中间，而在羊膜层中未见明显炎细胞浸润。滋养层除细胞排列略显松散外，绒毛膜其余结构及羊膜均未见明显异常。中重度绒毛膜羊膜炎者，炎细胞数量较多，呈局灶性或带状密集分布于绒毛膜的滋养细胞层靠近假基底膜处，或穿透假基底膜分散分布于网状层中，滋养细胞排列紊乱，部分细胞变性以细胞水肿为主，还可见散在凋亡细胞及灶性坏死。绒毛膜网状层及羊膜海绵层可见不等程度的增厚，其中Hofbauer细胞略增多，可能与炎性浸润有关。在羊膜层，阳性细胞主要浸润纤维<WP=6>母细胞层的外层边缘，除海绵层明显变薄外，羊膜其余各层在光镜下无明显改变。无炎细胞浸润的PROM胎膜标本中，可见部分滋养细胞的退形性变及散在的凋亡细胞，可能与某些病毒感染有关。（二）免疫组织化学观察：1.MMP-9主要表达于淋巴细胞、中性粒细胞、浆细胞等炎性细胞的胞浆中，呈明显的棕色颗粒状，在纤维母细胞中呈弱表达。在胎膜的固有细胞如羊膜上皮细胞、滋养层细胞、Hefbauer细胞等中几乎无表达。(1) 足月和未足月PROM与正常对照相比,均有统计学差?