【摘 要】
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目的:研究氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）自噬的影响及机制,探讨非酒精性脂肪性肝炎的发病机理。方法:（1）体外培养HSC-T6细胞,剂量效应组用质量浓度（0、10、20、40、60μg/m L）的ox-LDL处理HSC-T6细胞24 h;时间效应组用20μg/m L的ox-LDL处理HSC-T6细胞0、3、6、12、24 h后,Western blot检测自噬相关蛋
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目的:研究氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）自噬的影响及机制,探讨非酒精性脂肪性肝炎的发病机理。方法:（1）体外培养HSC-T6细胞,剂量效应组用质量浓度（0、10、20、40、60μg/m L）的ox-LDL处理HSC-T6细胞24 h;时间效应组用20μg/m L的ox-LDL处理HSC-T6细胞0、3、6、12、24 h后,Western blot检测自噬相关蛋白LC3 II、Beclin1、p62的表达。（2）不同质量浓度（0、10、20、40、60μg/m L）的ox-LDL处理HSC-T6细胞12 h后,Western blot检测通路相关蛋白Wnt5a、p-PKCδ、p-STAT3的表达。（3）将HSC-T6细胞分为Control组、ox-LDL组、ox-LDL+si-NC组和ox-LDL+si-Wnt5a组。用Western blot、q RT-PCR分别检测LC3 II、Beclin1、p62、p-PKCδ、p-STAT3的表达;免疫荧光检测LC3 II荧光亮点的表达;油红O染色观察HSC-T6细胞脂滴含量变化;消化法检测HSC-T6细胞培养液中羟脯氨酸（Hyp）的含量;ELISA检测细胞培养液中透明质酸（HA）和层粘连蛋白（LN）的含量。（4）PKCδ抑制剂Rottlerin预处理细胞:将HSC-T6细胞分为Control组、ox-LDL组、ox-LDL+DMSO组和ox-LDL+Rottlerin组。Western blot、q RT-PCR分别检测LC3 II、Beclin1、p62、p-STAT3的表达;免疫荧光检测LC3 II荧光亮点的表达;油红O染色观察HSC-T6细胞脂滴含量;消化法检测HSC-T6细胞培养液中羟脯氨酸（Hyp）的含量;ELISA检测细胞培养液中透明质酸（HA）和层粘连蛋白（LN）的含量。结果:（1）经ox-LDL处理后HSC-T6细胞中LC3 II、Beclin1蛋白含量增加,p62降解增多,且在ox-LDL质量浓度为20μg/m L作用12 h达到峰值（P<0.05）。（2）ox-LDL质量浓度为20μg/m L,作用12 h时HSC-T6细胞Wnt5a、p-PKCδ、p-STAT3蛋白表达显著升高（P<0.01）。（3）敲低Wnt5a后,自噬相关蛋白LC3 II、Beclin1表达减少,p62降解减少,通路相关蛋白p-PKCδ、p-STAT3表达减少,细胞内LC3 II荧光亮点减少,脂滴含量减少,细胞培养液中Hyp、HA、LN含量也减少（P<0.05）。（4）抑制PKCδ后,LC3 II、Beclin1表达减少,p62降解减少,通路相关蛋白p-STAT3表达减少,细胞内LC3 II荧光亮点减少,脂滴含量减少,细胞培养液中Hyp、HA、LN含量也减少（P<0.05）。结论:（1）ox-LDL可诱导HSC-T6细胞自噬。（2）ox-LDL可促进HSC-T6细胞Wnt5a/PKCδ信号通路活化。（3）ox-LDL可能通过增强Wnt5a/PKCδ通路诱导HSC-T6细胞自噬。
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