【摘 要】
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目的:深入研究负载葡萄糖酸氯己定壳聚糖纳米微球（CSn-CG）的多孔聚乳酸/纳米羟基磷灰石（PLA/nHA）复合支架的理化性能、细胞相容性及抑菌活性,以期为构建组织工程骨提供一种新型抑菌支架。方法:1.CSn-CG的表征、缓释性能及抑菌性能检测。采用离子交联法,完成空白壳聚糖纳米微球（CSn）与CSn-CG的制备。透射电镜（TEM）观察纳米微球的形态。X射线衍射仪（XRD）、傅立叶变换红外光谱仪（
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目的:深入研究负载葡萄糖酸氯己定壳聚糖纳米微球（CSn-CG）的多孔聚乳酸/纳米羟基磷灰石（PLA/nHA）复合支架的理化性能、细胞相容性及抑菌活性,以期为构建组织工程骨提供一种新型抑菌支架。方法:1.CSn-CG的表征、缓释性能及抑菌性能检测。采用离子交联法,完成空白壳聚糖纳米微球（CSn）与CSn-CG的制备。透射电镜（TEM）观察纳米微球的形态。X射线衍射仪（XRD）、傅立叶变换红外光谱仪（FTIR）检测两种纳米微球的性质。体外释放实验评估不同载药浓度壳聚糖纳米微球的缓释性能,并计算纳米微球的载药率。琼脂扩散法检测不同载药浓度壳聚糖纳米微球的抑菌效果,从而筛选出具有最佳抑菌效果的载药浓度的CSn-CG纳米微球以用于下一步研究。2.PLA/nHA/CSn-CG复合支架的表征、缓释性能、细胞相容性及抑菌性能检测。运用数字化设计3D打印技术以聚乳酸（PLA）和纳米羟基磷灰石（nHA）为原料制备PLA/nHA支架,以浸泡法搭载CSn、CSn-CG。实验分组:PLA/nHA组、PLA/nHA/CSn组、PLA/nHA/CSn-CG组。针对各组支架,通过扫描电镜（SEM）观察3组支架的表面形态;XRD、FTIR、X射线光电子能谱仪（XPS）对支架进行表征分析;体外释放实验评估支架的缓释性能;CCK-8法评估支架的生物相容性;琼脂扩散法检测支架的抑菌效果。3.采用SPSS 25.0软件包对所得数据进行统计分析。结果:1.TEM显示,CSn-CG为大小均匀的纳米微球,平均粒径（195±5.12）nm。XRD、FTIR结果显示CG成功包载于CSn纳米微球中。体外释放实验结果表明不同载药浓度壳聚糖纳米微球显示出良好的缓释性能。体外抑菌实验结果显示,CSn周围未出现抑菌圈,而含有1 mg/m L、2 mg/m L、5 mg/m L不同浓度CG的CSn-CG各组均出现抑菌圈,其抑菌圈直径（mm）分别为:（17.3±0.2）mm、（18.8±0.2）mm、（19.8±0.2）mm,其抑菌圈直径随着CG浓度的增加而增加（P＜0.05）。2.SEM发现,各组支架均为三维网状结构,孔径规则,高倍电镜可见纳米微球附着在支架表面。EDS能谱分析及XPS检测表明,PLA/nHA/CSn-CG支架中含有PLA/nHA、CS和CG的所有特征性元素:C、N、O、Cl、Ca、P。FTIR、XRD分析表明,CSn-CG通过物理方式吸附于PLA/nHA支架上,不会造成支架结构的晶相改变,对支架原有理化性能无影响。支架体外释放结果表明,CG于24 h内见明显的初始突释,接着低速释放。CCK-8结果显示:培养1d时,PLA/nHA/CSn-CG组的A值较対照组无明显差异,4组的A值之间无统计学差异（P＞0.05）;培养3d时,各组A值都较1d时升高（P＜0.05）;培养5d时,各组A值较3d时增大（P＜0.05）。CCK-8结果表明PLA/nHA/CSn-CG组支架对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞（MC3T3-E1）的存活无抑制作用,具有良好的细胞相容性。体外抑菌实验结果显示,对于金黄色葡萄球菌（S.aureus）、大肠杆菌（E.coli）,PLA/nHA/CSn-CG支架皆存在明显的抑制效应,培养24 h时对S.aureus和E.coli的抑菌圈直径分别为（21.8±0.2）mm和（22.5±0.3）mm,而对于这2类细菌,支架在抑制效应方面未表现出明显区别。结论:1.PLA/nHA/CSn-CG复合支架具有良好的理化性能、缓释效果和细胞相容性。2.该支架具有良好的体外抑菌作用,对于具有感染风险的大段颌骨缺损的修复重建具有广阔的应用前景。
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