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禽腺病毒（Aviadenovirus）是一类禽类重要的病原体,毒株间致病力差异较大。2型鸭腺病毒（Duck Aviadenovirus 2 type,DAd V-2）是近年来新发现的鸭腺病毒。本研究从临床病死番鸭中分离到一株DAd V-2,从以下三个方面进行研究。第一,扩增病毒全基因组并对其致病性进行鉴定。从安农大禽病诊断中心采集病死番鸭肝,研磨后通过尿囊腔接种SPF鸡胚,收集7 d后死亡鸡胚的尿囊液和鸡胚肾脏,提取病毒的DNA,应用PCR扩增病毒特异性基因片段,最后经测序和比对确定为DAd V-2。根据已经报道的DAd V-2序列设计13对特异性大片段引物对基因组进行扩增,拼接目的序列并对病毒基因序列进行分析。结果发现,病毒的基因组包含43024bp,命名为HF-AH-2020,BLAST结果显示与已经报道的广东株和GR株的的同源性分别为98.6%和89.4%。分离株可以7 d左右致死鸡胚。摘取病死鸡胚的主要脏器,应用绝对荧光定量PCR计算病毒的载毒量,结果显示肝脏的病毒载量最高,其次是十二指肠、脾脏、肾脏、腺胃、肌胃、心脏,大脑最低。测定病毒的滴度,按照103.24TCID50/0.1 m L/只的量,接种15日龄的SPF鸡和番鸭,结果显示,该分离株均不能导致动物致死,但所接种动物体内的肝脏、心脏和肾脏均可以检测到病毒的存在,这说明病毒可以在动物器官内复制但致病力较低。第二,分离株诱导细胞产生干扰素的机制。纯化后的分离株感染原代肾细胞5-7 d后,提取细胞的总RNA并进行反转录,应用相对荧光定量PCR检测病毒感染细胞后I型干扰素IFN-β和II型干扰素IFN-γ的表达及其相关通路基因。结果发现,该病毒感染后,可以引发STING通路相关的基因MDA5、STING、MAVS和IRF7表达,从而导致IFN-β基因表达量的显著上升。同时可以引发NF-k B介导的IFN-γ基因的表达。这说明,该病毒感染后可以导致IFN的极大提高,从而帮助动物机体抵御该病毒的感染。第三,对病毒的主要结构蛋白进行细胞内定位分析。构建含有病毒Hexon和Fiber2基因片段的重组质粒pm Cherry-C1-Hexon、pm Cherry-C1-Fiber2,转染至真核细胞293T,通过激光共聚焦技术确定蛋白在细胞内定位。研究结果显示Hexon和Fiber2表达的蛋白分别定位于为细胞质和细胞核。