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睾丸间质细胞可在雄性动物中产生雄激素，是支持精子发生和健康所必需的，其数目和功能随着雄性动物年龄的增长而下降，睾丸间质细胞的凋亡与睾丸功能密切相关。以往的研究表明，褪黑素可抑制细胞凋亡，包括睾丸间质细胞，但绝大部分都是通过膜受体发挥作用。核受体RORα在许多组织发育和分化中起着重要的作用，同时也参与了多种细胞凋亡的过程，然而在褪黑素抑制睾丸间质细胞凋亡的过程中核受体是否参与尚不明确，此外，p53可通过改变凋亡相关蛋白表达促进细胞凋亡，但在睾丸间质细胞中也尚未见报道。因此，本研究旨在研究褪黑素核受体RORα及p53对小鼠睾丸间质细胞凋亡的影响。利用免疫荧光技术检测褪黑素核受体RORα在小鼠睾丸间质细胞中的表达与定位，通过荧光定量PCR、Western-Blot方法检测褪黑素对其核受体RORα表达的影响；利用流式细胞术、MTT、TUNEL等方法研究褪黑素核受体RORα及p53在褪黑素抑制睾丸间质细胞凋亡的作用。研究结果如下：
1.免疫荧光结果表明，RORα表达于小鼠睾丸间质细胞并定位于细胞核中，10ng/mL褪黑素可促进核受体RORα表达(P＜0.05)。
2.使用褪黑素及其核受体RORα拮抗剂SR1001单独或组合处理小鼠睾丸间质细胞36h，结果表明，褪黑素可显著提高睾丸间质细胞活力(P＜0.05)，降低细胞凋亡率(P＜0.05)，同时，显著上调抗凋亡基因BCL-2的mRNA和蛋白表达(P＜0.05)，降低促凋亡基因BAX及p53的mRNA和蛋白表达(P＜0.05)，而SR1001预处理2h可使褪黑素的抗凋亡作用被逆转，包括细胞活力及抗凋亡基因BCL-2表达显著下降(P＜0.05)，细胞凋亡率及促凋亡基因BAX表达显著上升(P＜0.05)。
3.此外，我们检测结果发现褪黑素可显著降低p53表达(P＜0.05)。之后利用三种siRNA干扰技术敲减p53基因表达，siRNA2效果最显著(P＜0.001)，敲减p53逆转了由RORα介导的褪黑素对小鼠睾丸间质细胞的抗凋亡作用，细胞活力及抗凋亡基因BCL-2表达显著上调(P＜0.05)，细胞凋亡率及促凋亡基因BAX表达显著下降(P＜0.05)。
本研究结果表明，褪黑素通过RORα/p53通路抑制小鼠睾丸间质凋亡。
1.免疫荧光结果表明，RORα表达于小鼠睾丸间质细胞并定位于细胞核中，10ng/mL褪黑素可促进核受体RORα表达(P＜0.05)。
2.使用褪黑素及其核受体RORα拮抗剂SR1001单独或组合处理小鼠睾丸间质细胞36h，结果表明，褪黑素可显著提高睾丸间质细胞活力(P＜0.05)，降低细胞凋亡率(P＜0.05)，同时，显著上调抗凋亡基因BCL-2的mRNA和蛋白表达(P＜0.05)，降低促凋亡基因BAX及p53的mRNA和蛋白表达(P＜0.05)，而SR1001预处理2h可使褪黑素的抗凋亡作用被逆转，包括细胞活力及抗凋亡基因BCL-2表达显著下降(P＜0.05)，细胞凋亡率及促凋亡基因BAX表达显著上升(P＜0.05)。
3.此外，我们检测结果发现褪黑素可显著降低p53表达(P＜0.05)。之后利用三种siRNA干扰技术敲减p53基因表达，siRNA2效果最显著(P＜0.001)，敲减p53逆转了由RORα介导的褪黑素对小鼠睾丸间质细胞的抗凋亡作用，细胞活力及抗凋亡基因BCL-2表达显著上调(P＜0.05)，细胞凋亡率及促凋亡基因BAX表达显著下降(P＜0.05)。
本研究结果表明，褪黑素通过RORα/p53通路抑制小鼠睾丸间质凋亡。