丁香油协同月桂酸对金黄色葡萄球菌的抑菌机制及应用研究

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金黄色葡萄球菌是一种常见的食源性致病菌,误食受金黄色葡萄球菌污染的食品,可能会引起食物中毒。因此,对金黄色葡萄球菌进行控制,抑制其在食品中的生长繁殖十分重要。本文研究了丁香油、百里香油、薄荷油等三种植物精油以及中链脂肪酸月桂酸对金黄色葡萄球菌的抑制作用,筛选出对金黄色葡萄球菌具有协同抑制作用的组合丁香油与月桂酸,同时结合RNA转录测序技术揭示了该组合对金黄色葡萄球菌的抑制机制,并将丁香油和月桂酸协同组合制成抑菌保鲜液用于生鲜米粉,探究其对生鲜米粉的保鲜效果。本文测定了丁香油、薄荷油、百里香油等三种植物精油以及中链脂肪酸月桂酸对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度、最小杀菌浓度,其中丁香油的抑制效果最好,MIC和MBC分别为2.00μg/m L和4.00μg/m L,月桂酸的MIC和MBC则分别为9.00μg/m L和18.0μg/m L。通过棋盘法测定三种精油与月桂酸联合的抑菌效果,得到具有协同效应的组合丁香油与月桂酸,最佳配比为1/4 MIC丁香油+1/4 MIC月桂酸,此时分级抑菌浓度系数为0.50。与丁香油或月桂酸单独作用时相比,二者协同时对金黄色葡萄球菌的生长有明显的抑制作用,并且对细菌细胞膜造成破坏,造成细胞内核酸、蛋白质、各种离子和无机盐的渗漏,荧光显微镜显示细菌不同程度死亡。此外,结晶紫染色法实验显示丁香油与月桂酸协同处理不仅能抑制金黄色葡萄球菌生物膜的形成,对成熟的生物膜也有显著的清除作用。通过RNA转录测序技术分析丁香油和月桂酸协同处理对金黄色葡萄球菌的抑菌机制,共鉴定出273个差异表达基因(Differentially expressed genes,DEGs),在新陈代谢、遗传信息处理、环境信息处理、细胞过程等方面表现丰富。丁香油和月桂酸协同处理后,参与肽聚糖生物合成的基因mur G、upp S和dgk A,参与金黄色葡萄球菌黄素(Staphyloxanthin,STX)生物合成的基因crt I、crt M和crt O,参与三羧酸循环和磷酸戊糖途径的基因sdh C和rpi A,参与氨基酸生物合成和转运的基因aro D、opp B和B4602_RS01475,以及钾转运基因ktr B均上调表达,而参与脂质代谢的基因gcd H、fad D和fad N,参与氨基酸代谢的基因alr、hut H和pru A,参与乳糖代谢的基因lac C,以及钾转运基因kdp A均下调表达。丁香油和月桂酸协同处理,通过破坏细胞壁、影响细胞膜流动性、扰乱能量代谢、干扰细胞渗透压平衡等途径,抑制金黄色葡萄球菌的生长和繁殖,导致细菌死亡。将具有协同抑菌作用的组合丁香油和月桂酸制成抑菌保鲜液,应用于生鲜米粉保鲜。经过抑菌保鲜液处理,生鲜米粉样品的初始菌落数比对照组的低至少1.50 log CFU/g,超过安全限值(6 log CFU/g)的时间由24 h延长至72 h;保鲜液处理对生鲜米粉贮藏期间水分含量的影响不大;72 h时,对照组的酸度值比处理组至少增加了0.8°T;抑菌保鲜液处理可以提高生鲜米粉的蒸煮品质,降低蒸煮损失率、提高蒸煮吸水率、降低熟断条率及降低糊汤吸光度;抑菌保鲜液处理对感官品质有积极影响,能稳定生鲜米粉颜色、气味、质地、味道和外观,保持生鲜米粉的品质。综上所述,本研究验证了丁香油和月桂酸对金黄色葡萄球菌具有协同抑制作用,为抑制食品中金黄色葡萄球菌的生长提供新的思路。
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