扇贝裙边糖胺聚糖提取分离与生物活性研究

来源 :大连海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:haibolovemj
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扇贝是一种双壳类软体动物,其壳、肉及珍珠层都具有极高的利用价值,从古至今是一种受欢迎的营养保健品。近年来随着海洋生物大面积研究开发利用,发现扇贝裙边也具有降血脂、扩张血管、抗氧化等多种生物活性。在生产加工扇贝柱的过程中大部分扇贝裙边被作为下脚料废弃物处理,没有被充分利用,因此对扇贝裙边下脚料中糖胺聚糖的深入研究及开发利用成为当下研究热点。本研究以扇贝裙边下脚料为原材料,对扇贝裙边糖胺聚糖提取分离及生物活性进行研究,主要研究内容及结果如下:比较水浴加热、超声和闪式破碎结合蛋白酶酶解三种方法进行扇贝裙边糖胺聚糖的提取,以闪式破碎结合蛋白酶酶解的提取效果最好。筛选了木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶三种蛋白酶,中性蛋白酶酶解裙边制备糖胺聚糖的效果最好。结合单因素分析和正交实验,获得适宜的闪式破碎结合蛋白酶酶解条件为:酶用量为1.1%,料液比为1:14,酶解温度为40℃,酶解时间为3h。在此条件下,通过比较sevage法、三氟三氯乙烷法和三氯乙酸法除蛋白效果,确定三氯乙酸法为最佳除蛋白法。并经30%、50%和80%乙醇分级沉淀获得不同分子量的糖胺聚糖GAG-30、GAG-50和GAG-80,提取率分别为2.74%、0.56%、7.68%。得到的糖胺聚糖粗品经DEAE-52纤维素离子交换色谱和SephadexG-100凝胶柱色谱进一步分离纯化得到较为单一的糖胺聚糖。红外光谱图谱显示有多个糖胺聚糖特征基团吸收峰,且在9501250cm-1波数范围内有强吸收峰,提示该糖胺聚糖为吡喃型氨基多糖。通过体外酶—血管紧张素Ⅰ转化酶(ACE)和脯氨酸内肽酶(PEP)抑制活性筛选体系,对乙醇分级沉淀得到的三种糖胺聚糖GAG-30、GAG-50和GAG-80进行抑制ACE和PEP活性的研究,结果表明三种糖胺聚糖具有很好的抑制ACE活性,IC50值分别为0.575mg/mL、0.438mg/mL、7.072mg/mL。GAG-30和GAG-50部分对ACE的抑制作用较强。但三种扇贝裙边糖胺聚糖没有对PEP的抑制作用,即初步推测其不具有抗抑郁生物活性。本论文的研究为开发和利用海洋贝类裙边中活性多糖提供一定的理论依据。
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