他克莫司(Tacrolimus,FK506)是继环孢素A以后的又一细胞因子合成抑制剂。与环孢素(CsA)相比,他克莫司体内外试验证实其免疫活性为环孢素A的50～100倍,临床可有效预防肾移植后急性排斥反应的发生。他克莫司于1985首次分离获得,并于1989年试用于临床以来,取得了良好的评价,现已作为预防、治疗排斥反应以及自身免疫性疾病的一线药物。1、他克莫司质量研究本文通过外观、光照试验、引湿性试验,考察了他克莫司的性状,证明本品无明显的引湿性;测定了他克莫司的物理常数如熔点、溶解度和比旋度,其中熔点与DSC作了比较。他克莫司主要采用液相色谱保留时间和红外光谱鉴别,液相色谱保留时间鉴别专属性强,而红外光谱证明与本品分子结构中的官能团一致,是原料药有效的鉴别手段。由于本品分子结构的特点与发酵工艺对其质量影响的复杂性,有关物质的检查成为本品质量研究的重点。首先对有关物质检测系统进行了研究和优化,通过等度高效液相色谱柱温和溶剂的选择,证明需要较高的柱温才能有效地检测他克莫司及其有关物质,乙腈作为溶解本品的溶剂将减少样品在溶剂中异构体的转化。为了进一步有效分离有关物质,在等度系统的基础上调整为梯度洗脱的方式,并对流动相的组成、梯度的比例及色谱柱、波长等作了研究,确定了较为优化的高效液相色谱检测有关物质的条件,并进行了方法学验证。验证参数包括方法专属性、溶液稳定性和检测限(10ng)。采用LC-MS对本品主要的有关物质进行了结构归属。试验表明,用本文建立的HPLC法检查他克莫司中的有关物质,能分离酸、碱、氧化、光照、高温破坏的降解物并能与工艺过程中各中间体分离,可有效地控制药品质量。对三批样品中的有关物质进行检测,结果均小于1.0%。因本品合成工艺中用乙醇和丙酮为溶剂,故采用气相色谱顶空进样法检查它们的残留量,方法学研究结果表明,方法的专属性、重复性和灵敏度均符合测定要求。在此基础上检测三批样品中的有机溶剂残留量均符合药典要求。对其他检查项目如乙醇溶液的澄清度与颜色、结晶水、炽灼残渣、重金属、砷盐、硫酸盐、氯化物也分别作了研究。根据本品的性质研究了高效液相色谱法测定他克莫司含量的方法,对分析方法的效能指标进行了实验验证,包括线性与范围、回收率、精密度、溶液稳定性等,结果证明含量测定方法可行。三批样品含量测定结果均大于98.5%。上述他克莫司的质量研究,为控制产品质量和制订质量标准,提供了实验数据。2、他克莫司质量标准制订及其起草说明在全面的质量研究基础上,结合实际情况,制定了科学合理、操作方便的质量标准,包括性状、鉴别、检查、含量测定等项目,主要有物理常数熔点和比旋度的测定,用光谱(红外光谱)、色谱(高效液相色谱)鉴别他克莫司,用高效液相色谱法测定含量和有关物质,用气相色谱顶空进样法检查乙醇、丙酮的残留量、还有炽灼残渣、重金属、砷盐及水分检查等。质量标准的起草说明,对质量标准制订的项目及其指标的必要性、合理性和可行性作了进一步说明。3、他克莫司稳定性考察在科学的质量标准基础上,按照药典附录的要求,进行了他克莫司稳定性考察,包括影响因素试验、加速试验和长期稳定性试验。实验结果表明他克莫司样品在高湿、高温下较稳定,但应避光保存;加速试验6个月和长期稳定性12个月的结果也表明样品较为稳定。本实验结果为他克莫司的贮存条件和制订有效期提供了依据,同时为制剂工艺的设计和制剂质量研究提供了参考信息。