木质纤维素原料体系中乳酸菌抗逆性和半纤维素降解酶的研究

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本论文对木质纤维素生物炼制技术中的两个重要问题进行了研究。首先,对木质纤维素来源发酵抑制物对乳酸片球菌Pediococcus acidilactici DQ2与另外两株片球菌P.acidilactici DSM20284和P. pentosaceus ATCC25745在同样发酵条件下进行了产乳酸能力的比较。结果表明,Pediococcus acidilactici DQ2在高葡萄糖浓度,高木质纤维素水解抑制物浓度下,都表现出了高的葡萄糖消耗速率和高的乳酸浓度。由此得出结论:Pediococcus acidilactici DQ2的优越产乳酸的能力,源自该菌株本身,而非该片球菌属的共性。另外,对热葡糖苷酶地衣芽孢杆菌(Geobacillus thermoglucosidasius)来源耐热木聚糖酶基因在枯草芽孢杆菌中的克隆、表达和酶的特性进行了研究。实验首先以G. thermoglucosidasius KCCM12265基因组为模板,扩增出xylanase基因,之后将其亚克隆至pJK表达载体,最后转化至Bacillus subtilis宿主中进行木聚糖酶(Xylwt)的表达。随后,为提高木聚糖酶的产量和耐热性,对这段木聚糖酶基因进行突变,同时对该突变后的基因进行理性定点突变,由此分别得到两种新的木聚糖酶XylA和XylA1。实验对各木聚糖酶的胞外酶活和胞内酶活(包括可溶性和不可溶性)、蛋白质含量、酶的耐热性、最适温度和最适pH进行了检测和分析。结果发现,粗酶液中XylA和XylA1的最适pH都是6.0,酶活力随着温度的升高而升高,同样条件下80℃下的酶活比50℃提高5倍以上。XylA在粗酶液中的酶活比Xylwt提高了8倍左右。二者在80℃水浴处理30min之后,酶活都可以维持在80%以上,表现出了极高的耐热性。这表明,XylA在动物饲料生产等工业应用方面具有很大的潜力。
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