小麦-易变山羊草2B/2Sv易位系的筛选鉴定

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近缘种属是小麦遗传改良的重要基因源。小片段易位系是利用外源基因的重要手段。课题组前期发现易变山羊草AS116的2Sv染色体携带有抗条锈病基因。利用能够诱导部分同源染色体重组的开县罗汉麦,创制了60份潜在发生2B/2Sv初级易位系。基于此,本研究结合KASP分子标记和荧光原位杂交技术,筛选纯合易位系并鉴定这些易位的真实性。同时,比较不同易位系对条锈病的抗性表现,定位2Sv抗条锈病基因的位置,主要研究结果如下:1.利用课题组开发的2B/2Sv短臂端部特异KASP标记2B/2Sv-10Mb和长臂标记2B/2Sv-799Mb,筛选60份潜在初级易位系的自交后代。其中37份株系获得基因型符合纯合易位的后代。分子标记显示,重组发生在长臂的35份(22份2BS.2BL-2SvL类型;13份2SvS.2SvL-2BL类型),短臂的2份(1份2BS-2SvS.2SvL和1份2SvS-2BS.2BL)。21个株系显性易位染色体以杂合形式传递到了后代,而另外2个株系后代显示不存在易位染色体。2.以重复序列探针pSc119.2和pTa713的荧光原位杂交检测表明:32份株系的纯合易位系后代是真实存在的。其中,重组发生在长臂有30份(18份2BS.2BL-2SvL,12份2SvS.2SvL-2BL),重组发生在短臂有2份(1份2BS-2SvS.2SvL和1份2SvS-2BS.2BL)。而剩余的5份株系中,3份是由结构变异引起的假阳性,2份未获得细胞学结果。21份以杂合形式传递到后代的株系中,5份株系的易位染色体被细胞学证实,6份则是由染色体结构变异引起的假阳性,另外3份是由未知原因引起的假阳性;7份没有获得细胞学结果。3.55K SNP分析30份纯合易位系,29份与KASP标记和细胞学鉴定结果一致,1个株系(Hm638-18-263)可能为假阳性结果。29份纯合易位系将2B/2Sv染色体分成了18个bin,大小在0.01-662.80Mb之间(参考中国春2.0基因组)。4.利用条中34生理小种,在苗期(一叶一心)对12份覆盖整条2Sv染色体的纯合易位系进行抗条锈病鉴定,发现12份纯合易位系均感病。混合生理小种对三叶一心时期的易位系的鉴定表明,2Sv长臂端部可能携带一个生育期依赖的抗条锈病基因。
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