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本论文从七个方面对中药材牛大力离体培养与繁育进行研究,分别为:(1)外植体灭菌试验;(2)愈伤组织诱导试验;(3)愈伤组织分化试验;(4)无菌芽增殖试验;(5)无菌苗瓶内生根试验;(6)无菌苗瓶外生根试验(7)无菌生根苗移栽试验。主要研究结果如下:1.牛大力外植体灭菌试验效果(1)牛大力种子外植体灭菌的最适宜组合为:0.1%HgCl2灭菌时间20min+浸泡无菌水5个小时,污染率为40%,种子生根率达83.3%。(2)牛大力茎段外植体灭菌的最适宜组合为:0.1%HgCl2灭菌时间20min,污染率为40%,茎段外植体萌芽率为37.5%。2.牛大力愈伤组织诱导试验效果牛大力愈伤组织诱导最佳的激素组合是:MS+2,4-D2.0mg/L+IBA0.2mg/L+TDZ0.03mg/L,对嫩叶柄的诱导效果最佳,出愈率为100%,褐化率为O。3.牛大力愈伤组织分化试验效果在愈伤组织分化试验中,以MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.2mg/L+TDZ0.03mg/L组合对嫩茎段所诱导出来的愈伤组织,在分化培养基MS+6-BA0.5mg/L+KT1.0mg/L+IAA0.3mg/L培养90天分化效果最佳,芽分化率为10%。4.牛大力无菌芽增殖试验效果(1)MS基本培养基比Miller和改良White更利于牛大力无菌芽的增殖,芽增殖倍数为3.60倍(30d)和5.33倍(60d)。(2)在细胞分裂素6-BA、KT及其浓度比较试验中,以MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L组合,对芽增殖倍数最高,为3.70倍(30d)和5.43倍(60d)。(3)在不同生长素及其浓度比较试验中,以MS+IAA0.2mg/L+6-B A3.Omg/L组合,芽增殖倍数最高,为4.38倍(30d)和6.55倍(60d)(4)在两种细胞分裂素组合及其浓度比较试验中,以MS+TDZ0.03mg/L+6-BA3.0mg/L+IAA0.2mg/L组合,对芽增殖倍数最高,达6.00倍(30d)和9.65倍(60d)。(5)在无菌芽接种方式比较试验中,以单芽的芽增殖倍数最高,达5.34倍(30d)和10.63倍(60d)。(6)在不同蔗糖用量比较试验中,以蔗糖30g/L的用量,对芽增殖倍数最高,为4.30倍(30d)和6.4倍(60d)。(7)有机物椰子汁的添加有利于牛大力芽增殖,以椰子汁浓度为15%时,芽增殖倍数最高,达5.82倍(30d)和8.12倍(60d);马铃薯汁、香蕉汁的添加均不利于牛大力芽增殖。5.牛大力无菌苗瓶内生根试验效果(1)在单因子激素比较试验中,以1/2MS+ABT2.0mg/L生根率最高为27%。(2)在双因子激素组合比较试验中,以1/2MS+IBA3.0mg/L+NAA1.0mg/L组合生根率最高为67.5%。6.牛大力无菌苗瓶外生根试验效果牛大力无菌苗瓶外生根最佳处理组合为:ABT500mg/L浸泡12小时+移栽到进口花卉基质:珍珠岩(2:1)的基质上,移栽30天的成活率和生根率,分别为100%和81.3%。7.牛大力无菌生根苗移栽试验效果牛大力无菌生根苗移栽最佳基质组合为:进口花卉基质:珍珠岩(2:1),移栽30天,无菌生根苗成活率为94%。