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目的:喉癌,作为头颈部肿瘤的一种,在所有呼吸系统肿瘤中居第二位。大约2%~3%的呼吸系统恶性肿瘤为喉癌。目前喉癌的治疗方法包括手术治疗、放疗和化疗。手术是喉癌治疗最多使用的方法。手术治疗的原则是在完全切除肿瘤的前提下尽可能保留喉的发声功能,目的是提高喉癌患者的术后生活质量。然而,一项流行病学调查显示,在过去的20年间,喉癌的临床治疗效果尚不尽如人意。因此,从分子水平开展喉癌的发生发展机制的研究将有助于提高喉癌的诊治水平。本研究从分子水平探讨敲除长链非编码RNA MALAT-1基因对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞的抑制作用。方法:使用实时聚合酶链反应(RT-PCR)以永生化鼻咽上皮(NPE)细胞株NP-69作为参照检测FaDu、Hep-2和鼻咽癌CNE-2Z细胞MALAT1的表达,使用shmalat1慢病毒转染Hep-2细胞,RT-PCR检测其MALAT1的表达。增殖速率分析,MTT法明确MALAT-1对细胞增殖的影响。流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。采用Transwell小室检测Hep-2细胞的迁移。最后使用Matrigel侵袭实验评估shmalat1和shCtrl慢病毒转染的Hep-2细胞的侵袭能力。结果:使用RT-PCR检测FaDu、Hep-2和鼻咽癌CNE-2Z细胞MALAT1的表达,结果发现与NP-69细胞相比,FaDu、Hep-2和鼻咽癌CNE-2Z细胞MALAT1的表达显著增加。通过流式细胞仪评估细胞周期各时相的Hep-2细胞。与MOCK and shCtrl细胞相比,MALAT1-shRNA慢病毒转染细胞S期细胞数量显著增加。敲除MALAT1的Hep-2细胞克隆能力明显受损,下降约7.5%。shCtrl慢病毒处理过的细胞中观察到了平均124个,而在MALAT1敲除细胞观察到115个克隆细胞。用流式细胞仪进行凋亡定量分析表明,与未转染的MOCK细胞或shCtrl细胞相比(5.74%±0.22%),敲除MALAT1的Hep-2细胞,其细胞凋亡明显加快(4.83%±0.15%)(P<0.01)。MALAT1表达减少,抑制Hep-2细胞的迁移和侵袭,Hep-2细胞的侵袭迁移能力采用Transwell侵袭实验测定。Transwell迁移结果表明,迁移后24h,与MOCK细胞(202±6.6)和shCtrl细胞(170±3.8)相比,细胞数量显著减少(118±1.6,P<0.01)。使用划痕实验评估经shMALAT1或shCtrl慢病毒转染的Hep-2细胞的迁移力,经过24h迁移过程后。MOCK-treated细胞划痕修复了29±3.0%,shCtrl-treated细胞修复了24±3.0%。然而,在细胞中慢病毒转染shMALAT1划痕收窄只有14±0.2%(P<0.01)。结论:1、使用shmalat1慢病毒转染Hep-2细胞,其MALAT1表达减少91.5%。因此shmalat1慢病毒有效地影响MALAT1的表达,敲除MALAT1抑制Hep-2细胞增殖。2、通过流式细胞仪评估细胞周期各时相的Hep-2细胞。与MOCK and shCtrl细胞相比,MALAT1-shRNA慢病毒转染细胞S期细胞数量显著增加(P<0.01)。此外,细胞在G2/M期的百分比下降(P<0.01)。总之,这些数据表明,由于失去MALAT1,细胞阻滞在S期。3、经克隆形成实验测定,敲除MALAT1抑制Hep-2细胞克隆的能力。敲除MALAT1的Hep-2细胞克隆能力明显受损,下降约7.5%。shCtrl慢病毒处理过的细胞中观察到了平均124个,而在MALAT1敲除细胞观察到115个克隆细胞。4、用流式细胞仪进行凋亡定量分析表明,与未转染的MOCK细胞或shCtrl细胞相比(5.74%±0.22%),敲除MALAT1的Hep-2细胞,其细胞凋亡明显加快(4.83%±0.15%)(P<0.01)。5、敲除MALAT1的Hep-2细胞迁移和侵袭均受损。表明MALAT1在Hep2细胞的这些过程中发挥重要作用。6、MALAT1的低表达干扰抑制Hep-2细胞的迁移,从而确认MALAT1对Hep-2细胞迁移的重要作用。