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目的本实验通过体外细胞实验研究miR-27a-3p靶向FBXW7对骨肉瘤细胞生物学行为的影响,并探讨其作用机制,从而为骨肉瘤的分子靶向治疗奠定实验基础。方法（1）miR-27a-3p在骨肉瘤细胞中的表达及其对骨肉瘤细胞功能的影响:1.miR-27a-3p在骨肉瘤细胞中的表达:用RT-PCR实验分别检测骨肉瘤细胞MG-63、Saos-2和正常人成骨细胞h FOB1.19中miR-27a-3p的表达水平;2.过表达miR-27a-3p对骨肉瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响:将miR-27a-3p mimic转染到骨肉瘤细胞MG-63和Saos-2中,并用RT-PCR实验检测转染效率,转染成功后分别用CCK-8实验、Transwell迁移实验、流式细胞术检测骨肉瘤细胞MG-63和Saos-2增殖能力、迁移能力和凋亡水平的变化;3.敲减miR-27a-3p对骨肉瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响:将miR-27a-3p inhibitor转染到骨肉瘤细胞MG-63和Saos-2中,并用RT-PCR实验检测转染效率,转染成功后分别用CCK-8实验、Transwell迁移实验、流式细胞术检测骨肉瘤细胞MG-63和Saos-2增殖能力、迁移能力和凋亡水平的变化。（2）FBXW7在骨肉瘤细胞中的表达及其对骨肉瘤细胞功能的影响:1.miR-27a-3p靶基因的筛选:通过Target Scans Human7.2查询miR-27a-3p的靶基因并进行筛选,利用双荧光素酶报告基因检测实验验证miR-27a-3p与FBXW7是否存在靶向关系;2.FBXW7在骨肉瘤细胞中的表达:用RT-PCR实验分别检测骨肉瘤细胞MG-63、Saos-2和正常人成骨细胞h FOB1.19中FBXW7 m RNA的表达水平;3.过表达FBXW7对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响:用pc DNA3.1-FLAG-FBXW7（FBXW7的过表达质粒）转染骨肉瘤细胞MG-63和Saos-2,并用RT-PCR实验和Western blot实验检测转染效率,转染成功后分别用CCK-8实验和Transwell迁移实验检测骨肉瘤细胞MG-63和Saos-2增殖和迁移能力的变化;4.敲减FBXW7对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响:用si RNA-FBXW7转染骨肉瘤细胞MG-63和Saos-2,并用RT-PCR实验和Western blot实验检测转染效率,转染成功后分别用CCK-8实验和Transwell迁移实验检测骨肉瘤细胞MG-63和Saos-2增殖和迁移能力的变化。（3）miR-27a-3p靶向调控FBXW7的作用及机制:1.miR-27a-3p靶向调控骨肉瘤细胞中FBXW7的表达:采用Western blot方法分别检测用miR-27a-3p mimic和miR-27a-3p inhibitor转染后的骨肉瘤细胞MG-63和Saos-2中FBXW7的表达;2.miR-27a-3p调控骨肉瘤细胞中β-catenin的表达:采用Western blot方法分别检测用miR-27a-3p mimic和miR-27a-3p inhibitor转染后的骨肉瘤细胞MG-63和Saos-2中β-catenin的表达;3.miR-27a-3p通过靶向抑制FBXW7调控骨肉瘤细胞的增殖和迁移:将骨肉瘤细胞MG-63和Saos-2分别用miR-27a-3p inhibitor、miR-27a-3p inhibitor+si FBXW7转染后进行实验,用CCK-8实验和Transwell迁移实验检测各组细胞增殖能力和迁移能力的变化。结果（1）相对于正常人成骨细胞h FOB1.19,miR-27a-3p在骨肉瘤细胞MG-63和Saos-2中表达水平增高（P＜0.05）,转染miR-27a-3p mimic能增加骨肉瘤细胞MG-63和Saos-2中miR-27a-3p的表达量（P＜0.05）,且能够增强两株骨肉瘤细胞的增殖和迁移能力（P＜0.05）,同时降低它们的凋亡率（P＜0.05）;转染miR-27a-3p inhibitor可降低骨肉瘤细胞MG-63和Saos-2中miR-27a-3p的表达量（P＜0.05）,且可降低两株骨肉瘤细胞的增殖和迁移能力（P＜0.05）,同时提高它们的凋亡率（P＜0.05）。（2）根据生物信息学预测出FBXW7为miR-27a-3p的靶基因之一,双荧光素酶基因检测结果显示,相比于miR-27a-3p mimic NC组,在骨肉瘤细胞中转染miR-27a-3p mimic能下调野生型FBXW7-WT质粒组的荧光素酶活性（P＜0.05）,而突变型FBXW7-Mut质粒组的荧光素酶活性无明显变化（P＞0.05）;与正常人成骨细胞h FOB1.19相比,FBXW7 m RNA在骨肉瘤细胞MG-63和Saos-2中表达水平降低（P＜0.05）,转染pc DNA3.1-FLAG-FBXW7能增加骨肉瘤细胞MG-63和Saos-2中FBXW7的表达量（P＜0.05）,且能够降低它们的增殖和迁移能力（P＜0.05）,同时提高骨肉瘤细胞MG-63和Saos-2中β-catenin蛋白的表达水平;转染si RNA-FBXW7可降低骨肉瘤细胞MG-63和Saos-2中FBXW7的表达量（P＜0.05）,且可提高它们的增殖和迁移能力（P＜0.05）,同时降低骨肉瘤细胞MG-63和Saos-2中β-catenin蛋白的表达水平。（3）转染miR-27a-3p mimic会降低骨肉瘤细胞MG-63和Saos-2中FBXW7和β-catenin蛋白的表达水平（P＜0.05）;转染miR-27a-3p inhibitor会提高骨肉瘤细胞MG-63和Saos-2中FBXW7和β-catenin蛋白的表达水平（P＜0.05）;miR-27a-3p inhibitor+si FBXW7共同作用下的骨肉瘤细胞MG-63和Saos-2能部分恢复由miR-27a-3p inhibitor降低的增殖和迁移能力（P＜0.05）。结论（1）miR-27a-3p在骨肉瘤细胞中高表达,过表达miR-27a-3p促进骨肉瘤细胞增殖、迁移,抑制细胞凋亡;敲减miR-27a-3p抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移,促进细胞凋亡。（2）FBXW7在骨肉瘤细胞中低表达,过表达FBXW7抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移,抑制FBXW7的表达促进骨肉瘤细胞增殖和迁移。（3）miR-27a-3p靶向FBXW7的表达,影响骨肉瘤细胞增殖、迁移和凋亡,其作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。