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近年来,花粉作为优良的全营养、高活性保健食品,日益受到国内外科研工作者的关注。我国的花粉研究主要是围绕花粉的资源状况、活性成分、加工工艺和新产品开发等方面展开的,目前已获得大量科研成果。破壁加工是制约花粉开发利用的一个重要技术问题。近年来超微粉碎技术在植物物料粉碎中广泛应用,效果良好。花粉多糖是花粉中一种重要的活性物质。多糖类物质具有较宽的分子量分布,而分子量分布直接影响多糖的生物活性。以往关于花粉多糖生物活性的研究主要关注的是粗多糖,并未深入研究不同分子量多糖的生物活性。本文运用超微粉碎技术使油菜花粉破壁,对比了超微粉碎和普通粉碎对油菜花粉多糖溶出率的影响;采用膜过滤技术对油菜花粉超微粉多糖进行分子量分级,并对各级分的理化性质进行表征;通过体外抗氧化试验以及小鼠体内抗氧化和免疫试验,对各级分的生物活性进行研究,探讨分子量分布对油菜花粉超微粉多糖生物活性的影响。主要结果如下:1.采用超微粉碎技术对油菜花粉进行破壁加工,对比了不同浸提时间下油菜花粉超微粉和普通粉多糖溶出率的差异。结果表明,超微粉和普通粉多糖溶出速度的差异主要发生在提取的初始阶段。在料液比为1∶4,浸提温度为90℃,浸提时间为10 min时,油菜花粉超微粉多糖的溶出率最高,比普通粉多糖提高了241.65%,在60 min时则提高了52.62%,大于120 min时,两者的溶出率逐渐趋于一致;红外光谱分析显示,油菜花粉超微粉和普通粉多糖的光谱图基本吻合,无显著差异。超微粉碎技术能够在不改变油菜花粉超微粉多糖物质结构的基础上提高其溶出率和溶出速度。2.采用膜分离技术对油菜花粉超微粉多糖进行分子量分级,在单因素分析(时间、压力)的基础上,筛选出最佳超滤条件,并对所得各级分的性质和结构进行初步研究。试验结果表明,截留分子量为100kD、50kD和10kD的超滤膜的最佳操作压力分别为:1.1 MPa、1.3 Mpa和1.6Mpa,操作时间应分别控制在:28 min、36 min和48 min以内;通过HPLC对超滤所得四个级分(>100kD级分、50-100kD级分、10-50kD级分和<10kD级分)进行表征,图谱显示各级分的保留时间依次增大,峰位依次向右位移、分布变窄,表明多糖的分子量依次降低,超滤分子量分级效果良好;按照分子量由大到小的顺序,四个级分多糖的质量比约为2.3∶1∶1.1∶1.6,各级分多糖的纯度均高于68%,还原糖含量均低于1.4%。3.通过比较油菜花粉超微粉多糖各级分在体外对·OH和O2-·的清除作用,初步探索了分子量对多糖抗氧化活性的影响。试验结果表明:粗多糖和各级分多糖对不同的自由基有不同的清除作用,对·OH的清除作用较强,而对O2-·的清除作用稍弱;粗多糖和各级分中,50-100kD级分作用最强,优于粗多糖,粗多糖又优于>100kD级分,而<10kD和10-50kD级分的体外抗氧化活性微弱;并且各级分体外抗氧化活性均随着多糖浓度的上升而增强,两者之间呈现良好的量效关系。4.小鼠体内抗氧化和免疫试验表明:粗多糖和各级分多糖中,<50kD级分活性微弱;>100kD级分低剂量时表现出免疫活性,高剂量时表现出抗氧化活性,两种活性均随剂量升高而加强;粗多糖的抗氧化活性和免疫活性在中剂量时开始显现,高剂量时得到加强,其量效关系较为明显;50-100kD级分具有最好的生物活性,其抗氧化和免疫活性在低剂量时即显现,且随着用药剂量的加大,活性逐渐升高,但部分免疫活性指标在中剂量时达到最高,高剂量时有所下降。上述结果表明,与粗多糖和其它级分相比,油菜花粉超微粉多糖50-100kD级分具有高抗氧化和免疫活性,并且在对部分免疫功能的调节作用中存在着最佳药物浓度。