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旦的：绵羊是我国和世界上最有经济价值的家养动物之一。中国美利奴细毛羊更是我国优良的种质资源和经济物种。绵羊基因组主要组织相容性复合体(MHC),又叫绵羊白细胞抗原(Ovine Leukocyte Antigen, OLA),包含众多紧密连锁的免疫应答和调控基因,这些基因与动物抗病性以及疾病的易感性等密切相关。因此,对MHC区段的特征与功能研究至关重要。对该区段研究而中国美利奴细毛羊基因组BAC文库已经建好,并且MHC区段最小重叠度(Minimal Tiling Path, MTP)物理图谱已经搭建好,并完成测序以及对该区段进行了基因、重复序列以及microRNA等的预测,但是在MHCClassⅡa与MHC ClassⅡb之间因为染色体倒位存在一个大的gap。而这个gap所在区段的遗传连锁研究表明,是由于常染色体片段倒位产生,它将MHC ClassⅡ区域分割成两个不连续的区段ClassⅡa和ClassⅡb。2009年4月牛的全基因组序列公布,为绵羊基因组(特别是与牛相似的倒位区域)的研究提供了宝贵而丰富的资源。因此本研究的目的就是要根据牛的基因组序列和比较基因组学原理,利用PCR方法筛选中国美利奴细毛羊基因组BAC文库,最终利用有效阳性BAC克隆构建绵羊基因组MHC ClassⅡb延伸区域的MTP物理图谱,为绵羊基因组MHC区段倒位区域MTP物理图谱的一部分,进一步推动该倒位区域的研究,并推进整个绵羊基因组MHC区段完整的MTP物理图谱的构建,为今后的对绵羊的基础研究奠定基础。方法：首先,通过比较基因组学方法,根据已公布的牛(Bos Taurus)的基因组序列,选择位于BoLA ClassⅡb延伸区域的一些有效Markers/Symbols,并据此设计引物。然后,利用PCR方法从已有的中国美利奴细毛羊基因组BAC文库中筛选出候选的阳性BAC克隆并进行限制性酶切指纹图谱分析(Fingerprinting Analysis),搭建出初步的克隆重叠群(contig);然后,对阳性BAC克隆进行末端测序,并据此设计BAC末端引物,对克隆间的重叠关系进行PCR确证,最终绘制出中国美利奴细毛羊OLA ClassⅡb延伸区的MTP物理图谱。结果：(1)根据牛的基因组图谱,设计了26对用于文库筛选的候选PCR引物,最终条件优化好的可用于PCR筛选的引物为23对；(2)制备了已有基因组BAC文库的一(初)级384孔板混合池和二(次)级行混合池；(3)通过PCR方法筛选出58个阳性BAC克隆,并进行了限制性酶切指纹图谱分析和克隆间重叠关系的PCR确证,最终选择25个有效BAC克隆绘制出了OLA ClassⅡb延伸区的MTP物理图谱。结论：(1)利用牛的BoLA ClassⅡb延伸区的一些Markers/Symbols,通过PCR方法能筛选出阳性BAC克隆,不仅说明绵羊与牛在该区域的基因组序列同源性很高,而且证明运用PCR方法进行基因组BAC文库筛选是快速而行之有效的。(2)在本研究中有3对根据牛的基因组序列设计的引物没有从绵羊基因组中扩增出PCR产物,此外,在多处区域发现了两个或三个不同的Markers筛选出同一个BAC克隆的现象。此结果暗示,绵羊与牛之间在以后的平行进化过程中,该区域的局部基因组序列也许发生了丢失。(3)绵羊基因组该区域MTP物理图谱的构建,推进了绵羊MHC区段到位区域MTP物理图谱的构建,不仅充实了绵羊基因组信息,而且可以大大地促进整个绵羊基因组测序和反刍动物基因组比较研究。