背景与目的衰老是一种由遗传因素和内外环境多种复杂因素相互作用而引起的生物学过程,是生命周期中按照一定的规律发生在整体、器官、组织、细胞的形态功能的演变过程,表现为一系列随增龄而显示的全身性、渐进性、衰退性的变化或紊乱。关于人体衰老,是一个久经不衰的热门话题。长期以来,人们对人体衰老的起因、机制进行了不断的探索和研究,但迄今为止仍是一个尚未完全解开的谜。探索衰老发生的机制既是一个古老的问题,又是一个崭新的科研领域。随着近年来中医药学科的快速发展,以及人们崇尚自然养生理念的流行,使用中药材或药食两用食材进行养生延缓衰老拥有很好的研究前景。河南地域广阔,地理位置特殊,地形复杂,南北气候交错,形成南北区域兼容并存的丰富中药资源。大枣,金银花,四大怀药等产量丰富且质优,对于其功效的研究有助于因地制宜的发展本地经济。中药血清药理学是在整体动物给药一段时间后,取含药成分的血清代替中药粗提物进行体外实验的一种方法。自从1991年我国国家中医药管理局对此立题以来,这项研究已得到系统的开展。中药血清药理学的优势在于:体现了复方在体内系列转化效应,克服了药物本身的理化性质对实验研究的直接干扰。细胞像其他生物体一样,有一定的寿命。正常人的二倍体成纤维细胞在体外培养条件下,经历有限的分裂次数,进入一种不可逆的增殖停滞状态,即复制性衰老。这种在体外培养的细胞增殖传代的能力,反应了细胞在体内的衰老状况。因此,人二倍体成纤维细胞被公认为研究细胞衰老的模型。实验方法1.水提物的制备及检测:对大枣,金银花,山药,菊花,地黄进行热水浸提,取上清液减压浓缩除脂醇沉,分别得其水提物。对各水提物进行成分检测分析,对比标准品检测其含量。采用邻苯三酚自氧化法对各水提物进行体外抗自由基能力测定。2.含药血清的制备:日本大耳白兔雌性若干只,分为各药物组、空白对照组。药物组以适量水提物水溶液灌胃,空白对照组给予等量无菌动物饮用水。末次给药后颈动脉取血,分离血清,灭活后无菌超净台滤膜过滤,-70℃冰箱中保存备用。3.细胞培养及指标检测:取20和40代龄的人胚肺上皮成纤维细胞株(2BS细胞),分为:空白组、血清对照组、各药物组,连续干预培养4代后用于后期实验。取经处理后的各组细胞进行细胞周期及细胞凋亡测定,细胞上清检测抗氧化指标。4.统计学处理:本研究所获得数值型实验数据以SPSS12.0软件进行统计分析,所有试验数据均以(?)±s表示。对于正态分布且方差齐的资料,采用方差分析,多组样本之间的两两比较采用q检验。而对于非正态分布的资料采用秩和检验,多组样本之间两两比较采用基于秩次的M检验。检验水准α=0.05。实验结果1.通过对大枣,山药,地黄,金银花,菊花五种单方中药进行热水浸提,分别得到其水提物,对水提物进行成分检测分析,在五种水提物中,大枣水提物总糖含量最高(43.20±0.46),菊花水提物总糖含量最低(20.03±0.49)。对水提物总黄酮进行检测,金银花水提物总黄酮含量最高(15.63±0.35),地黄水提物总黄酮含量最低(1.97±0.25)。对五种水提物进行体外抗自由基能力测定,结果显示:水提物清除超氧阴离子自由基能力强弱顺序为:大枣＞地黄＞山药＞金银花＞菊花,且随着浓度的增加其清除率逐渐上升。2.五种山药水提物均能促进衰老细胞增殖;增加超氧化物歧化酶SOD的活性,降低脂质过氧化物MDA的含量,改善自由基代谢。大枣和山药水提物的作用最为明显,菊花水提物的作用最不明显。结论:1.各药物的水提物中均含有多糖、黄酮等众多生物活性物质,结合以往的研究资料提示,这些物质均具有抗氧化抗自由基的功能,且多种有效物质的协同作用效果明显。2.各药物的水提物对2BS细胞抗衰老作用的研究表明,各组水提物均具有抗氧化、清除自由基和增强机体抗自由基的能力,以大枣和山药水提物的作用最佳。结合第一部分的研究结果提示,水提物具有的抗氧化抗自由基能力与其所含的多糖及黄酮有关。