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目的以SD大鼠为研究对象,构建大鼠喉返神经挤压损伤模型。通过慢病毒转染体内双向调控右侧喉返神经挤压伤大鼠模型损伤局部的PTEN基因表达,探讨PTEN在喉返神经修复中的调控作用。方法以微血管夹挤压法建立雄性SD大鼠右侧喉返神经挤压伤模型,分别于术后3天、1、3、6、10及16周,以声图分析发声、喉镜观察喉肌运动、喉肌电图考察神经功能、以及以透射电镜观察神经纤维的显微结构的变化。构建以慢病毒为载体的PTEN干扰及过表达载体。通过以上慢病毒局部注射转染于大鼠喉返神经挤压伤模型的损伤局部,双向调控局部PTEN基因的表达。Realtime qPCR观察上述6 个时间点损伤局部PTEN、PI3K、Akt、GSK-3β、BDNF、GDNF mRNA的表达变化,同样行声图、喉镜、喉肌电图、及透射电镜检查。结果①构建雄性SD大鼠右侧喉返神经挤压伤模型成功,且比较假手术组,喉返神经损伤大鼠的肌电图、声图及喉肌运动相关参数在术后16周无统计学差异,电镜下观察情况神经形态术后16周恢复。②经测序验证,构建抑制PTEN之pLenti X1 Puro-PTENshRNA-eGFP慢病毒及过表达 PTEN 之 pLV.ExBi.P/Puro-CMV-PTEN-IRES-eGFP 慢病毒成功,明确MOI值,且确定PTENshRNA-3慢病毒的干扰效果最佳。③Realtime qPCR结果示PTENshRNA(KD)组在术后16周内(含16周)局部PTENmRNA水平均显著低于shRNA-N(NC)组、HBSS(CON)、单纯挤压伤(crush)组和假手术(sham)组,而PI3K、Akt、GSK-3β之mRNA水平均显著高于NC、CON、crush和sham组。PTEN过表达(OE)组在术后16周内(含16周)PTEN mRNA水平显著高于NC、CON、crush和sham组,而术后16周内PI3K、Akt、GSK-3β之mRNA水平均显著低于NC、CON、crush和sham组。同时,实验组NC、CON、crush组之PTEN mRNA水平在术后10周内(含10周)显著低于sham组,而PI3K、Akt、GSK-3β之mRNA 水平均显著高于sham组。KD组BDNF和GDNF mRNA表达水平在术后1～6周均显著高于NC、CON、crush组,在术后3天～10周显著高于sham组。OE组BDNF和GDNF mRNA表达水平在术后3天～3周均显著低于NC、CON、crush组。大鼠声图KD组10周恢复,NC、CON、crush组16周恢复,OE组16周未完全恢复。喉镜下KD组10周活动恢复(2级),NC、CON、crush组16周2级恢复,OE组16周未完全2级恢复。肌电图完全恢复情况同喉镜肌肉运动情况。电镜下,各组分别是KD组10周、NC、CON、crush组16周接近正常结构,OE组16周未恢复。结论以雄性SD大鼠喉返神经挤压损伤模型研究外周神经损伤修复的分子机制是可行的。通过慢病毒转染体内双向调控喉返神经挤压伤大鼠模型损伤局部的PTEN基因表达,发现①PTEN在调控喉返神经损伤修复过程中具有明显的负向调节作用;②损伤发生后机体通过下调PTEN表达,激活PI3K/Akt/GSK-3β通路,实现促进喉返神经修复的机能。