柴芩清肝方有效部位群提取物制备工艺与质量标准研究

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柴芩清肝方由柴胡、黄芩、白芍和甘草等中药组成,具有疏肝解郁,清热解毒的作用。临床上主要用于治疗慢性肝炎、肝硬化、胆囊炎,症见口苦、咽干、目眩、寒热往来、胁肋胀痛、胸胁苦满等。为提高临床疗效和质量可控,本课题以传统中医药理论为指导原则,运用现代制药技术,对该复方进行了临床前药学部分的研究工作。本论文的主要目的是对组方中药材的有效部位群进行提取、精制工艺研究,以及对有效部位群提取物进行质量标准研究,主要研究概述如下:1.含量测定方法研究:建立高效液相色谱法,同时测定柴芩清肝方中芍药苷、黄芩苷和甘草苷三种有效成分的含量。采用DiamonsilC18 (4.6×250mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,双波长检测:278nm(黄芩苷,甘草苷),230nm(芍药苷)。2.提取工艺研究:以主要有效成分黄芩苷、甘草苷和芍药苷为指标,采用正交试验,对水提取工艺进行研究。采用多成分加权综合评分方法考察的最佳提取工艺为:加8倍药材量的水,加热煎煮提取3次,每次提取1小时3.·精致工艺研究:通过对本方中黄芩苷、芍药苷、甘草苷和总黄酮在几种大孔吸附树脂上的吸附性与解吸特性的比较,确定分离有效部位提取物的最佳树脂为AB-8型大孔树脂,并对该树脂的吸附特性及各影响因素进行研究,优化工艺条件,得到本方有效部位群提取物的最佳纯化精制工艺条件。结果:以提取液浓缩至0.5 g·mL-1(生药)作为上样液,以3 mL·min-1的流速通过AB-8型大孔吸附树脂,用70%乙醇以5 mL·min-1的流速洗脱。洗脱液浓缩至相对密度为1.20-1.25(60℃)稠膏,置烘箱恒温60℃烘干,即得4.有效部位群提取物质量标准研究:针对方中柴胡、黄芩、白芍和甘草4味主要药材进行TLC鉴别实验,方法操作简单,重现性好,薄层色谱图斑点清晰。采用分光光度计法测定有效部位群提取物中总黄酮、总皂苷、总环烯醚萜苷的含量,总含量为82.57%。采用高效液相色谱-紫外光谱法对本品中黄芩苷、芍药苷和甘草苷进行了含量测定。综合定性定量测定结果,有效地控制了本品的质量,为柴芩清肝方建立了规范化的现代质量标准。
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