HPLC-ED法检测血浆和尿液游离型甲氧基肾上腺素类物质诊断嗜铬细胞瘤

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目的:1.建立一种高效液相色谱电化学法(High performance liquidchromatography-electrochemical detection,HPLC-ED)检测血浆和尿液游离型甲氧基肾上腺素类物质(Metanephrines, MNs),即甲氧基去甲肾上腺素(Normetanephrine,NMN)和甲氧基肾上腺素(Metanephrine,MN)。2.用所建立的方法测定正常人、原发性高血压患者(高血压病)、非嗜铬细胞瘤性肾上腺占位患者和嗜铬细胞瘤患者血浆游离型MNs浓度,探讨血浆游离型MNs对嗜铬细胞瘤诊断、鉴别诊断和预后。3.用所建立的方法测定对照组(上述高血压病和肾上腺占位患者)和嗜铬细胞瘤患者随机尿游离型MNs浓度,并计算其与肌酐比值MNs/Cr。探讨其在嗜铬细胞瘤诊断的作用。方法:1.采用阳离子交换固相萃取技术对血浆和尿液标本进行预处理;色谱柱ZORBAX SB-C18(3.0×100mm,3.5μm),柱温30℃;流动相为含0.10mol/L磷酸二氢钠、0.40mmol/L EDTA和0.50mmol/L辛烷磺酸钠溶液(pH3.2):乙腈(95.5:4.5);流速0.6ml/min;电化学检测器检测电压+0.85V;进样量50μl;检测时间20min。2.用所建立的方法检测了正常人(n=26)、高血压病患者(n=23)、肾上腺占位患者(n=24)和嗜铬细胞瘤患者(n=21)血浆游离型MNs浓度。3.用所建立的方法检测了对照组(n=18)和嗜铬细胞瘤(n=7)随机尿游离型MNs浓度,并计算MNs/Cr。结果:1. NMN和MN保留时间分别为4.3min和6.7min;血浆中NMN和MN线性范围均为25~2000ng/L,检测限分别为11ng/L和12ng/L,天内变异系数均小于4.4%,天间变异系数均小于6.3%,平均回收率在86.6%到117.0%之间。尿液中NMN和MN线性范围均为25~2500μg/L,检测限分别为5.9μg/L和11.3μg/L,天内变异系数均小于5.9%,天间变异系数均小于6.0%,平均回收率在92.8%到103.4%之间。2.嗜铬细胞瘤患者血浆游离型MNs浓度较其它三组显著增高(P均<0.05)。血浆游离型MNs敏感度和特异性分别为100%和89%。嗜铬细胞瘤患者血浆MNs浓度与肿瘤体积相关(NMN: r=0.952, P <0.001;MN: r=0.510, P=0.018)。嗜铬细胞瘤患者在肿瘤切除后血MNs浓度迅速降低。3.嗜铬细胞瘤患者尿液游离型MNs和MNs/Cr均明显高于对照组,具有统计学差异(P均<0.05)。尿液游离型MNs和MNs/Cr与血浆游离型MNs相关性显著(NMN: r=0.889, P <0.001;NMN/Cr:r=0.799,P <0.001;MN: r=0.828, P=0.018;MN/Cr:r=0.703, P <0.001)。尿液游离型MNs和MNs/Cr敏感度相同,均为85.7%,但尿液游离型MNs特异性(NMN44.4%,MN22.2%)明显低于MNs/Cr(NMN/Cr88.9%,MN/Cr88.9%)。结论:1.本研究建立了一种HPLC-ED方法检测血浆和尿液中游离型MNs。该方法成本低廉、敏感度高、准确性好,适合于实验室研究和临床常规检测。2.血浆游离型MNs是诊断、鉴别诊断嗜铬细胞瘤及预后观察的良好指标。3.随机尿中游离型MNs/Cr也可以作为取代24h尿分馏MNs诊断嗜铬细胞瘤的备选指标。
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