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目的：观察不同浓度苦参碱干预人肺腺癌A549细胞株48h后细胞侵袭转移能力的改变及对MMP-9表达的影响,探讨苦参碱抑制肿瘤侵袭转移的可能作用机制。方法：(1)MTT实验检测苦参碱对A549细胞增殖的作用设对照组及0.0625g/L、0.1250g/L、0.2500g/L和.5000g/L苦参碱干预组,对照组仅加等量的培养液。每隔2d更换含同样药物浓度的新鲜培养液,培养1-6天,加入MTT继续孵育4h后,酶标仪测570nm吸光度(A)值。计算细胞增殖抑制率。(2)细胞Matrivgel粘附实验96孔板每孔铺Matrivgel凝胶40μl(2g/L),用2%BSA20μL封阻。设对照组及0.0625g/、0.1250g/和0.2500g/干预组,收集药物作用满48h的A549细胞,用无血清RPMI1640培养液调整各组A549细胞密度为1×109/,每孔加入100μL。37℃培养1h后,PBS洗去未粘附细胞,加入MTT继续孵育4h后,酶标仪测570nm吸光度(A)值。计算细胞粘附抑制率。(3)细胞迁移实验细胞迁移的研究是通过使用Transwell小室测定细胞的迁移能力。设对照组及0.0625g/、0.1250g/和0.2500g/苦参碱干预组,收集干预满48h的A549细胞,用无血清RPMI1640培养液调整各组A549细胞密度为1×109/,取150μL移入上室。孵育10h后以棉签小心刮除滤膜上室面的细胞,固定染色后在400倍高倍镜下细胞计数,随机6个视野/孔或膜,取平均值作为结果。在200倍高倍镜下观察拍照。迁移细胞数=各下室面粘附的细胞数。计算细胞迁移抑制率。(4)Matrivgel侵袭实验在Transwell小室底部铺上Matrivgel凝胶(0.5g/L)50μL,置于24孔板内风干。设对照组及0.0625g/L、0.1250g/L和0.2500g/L苦参碱干预组,收集干预满48h的A549细胞,以无血清RPMI1640制成1×109/L单细胞悬液,取150μL移入小室。孵育48h后以棉签小心刮除滤膜上室面的细胞,固定染色后在400倍高倍镜下计数,随机6个视野/孔或膜。侵袭细胞数=各下室面粘附的细胞数。计算细胞侵袭抑制率。(5)半定量逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)检测MMP-9mRNA的表达设对照组及0.0625g/L、0.1250g/L和0.2500g/L苦参碱干预组,作用48h后收集细胞,抽提细胞总RNA,进行逆转录和PCR扩增。MMP-9扩增40个循环,其扩增片段长度为196bp,以p-肌动蛋白为内参照,扩增40个循环,长度285bp。(6)免疫细胞化学实验检测MMP-9蛋白的表达取对数生长期的细胞,制成单细胞悬液后,以5.0x104/孔接种于24孔板上,每孔加lml。24h贴壁后加入含苦参碱培基,使终浓度为0.0625g/L、0.1250g/L和0.2500g/L,对照组仅加等量的培养液。干预满48h后,加入4%多聚甲醛固定。一抗的稀释比例为1:100,4℃孵育过夜。然后按照免疫组化试剂盒规定的步骤进行,随机5个视野/孔照相,用图像分析系统观察分析。结果：(1)苦参碱对A549细胞增殖的抑制作用苦参碱0.1250g/L、0.2500g/L和0.500g/L组均能有效抑制A549细胞的增殖(p均<0.05),并且其抑制作用具有浓度依赖性。而苦参碱0.0625g/L组的增殖抑制作用较弱。(2)苦参碱对A549细胞粘附力的抑制作用对照组和各苦参碱干预组570nm吸光度(A)值分别为0.561±0.040、0.542±0.043、0.337±0.053、0.203±0.054。与对照组比较,苦参碱0.1250g/L和0.2500g/L组细胞粘附力均明显降低(P<0.05),而0.0625g/L组下降差异无显著性。各苦参碱干预组组间差异显著(P<0.05)。苦参碱抑制细胞粘附力的作用具有浓度依赖性。(3)苦参碱对A549细胞迁移能力的抑制作用对照组和各苦参碱干预组的迁移细胞个数分别为188.133±11.521、153.833±10.926、136.367±10.008、102.367±10.762。与对照组比较,各浓度苦参碱干预组迁移细胞数均明显减少(P<0.05),且各苦参碱干预组组间差异显著(P<0.05)。(4)苦参碱对A549细胞侵袭力的抑制作用对照组和各苦参碱干预组的侵袭细胞个数分别为155.267±8.221、133.200±8.036、106.533±9.273、78.967±7.189。与对照组比较,各浓度苦参碱干预组侵袭细胞数均明显减少(P<0.05),且各苦参碱干预组组间差异显著(P<0.05)。(5)苦参碱对A549细胞MMP-9mRNA表达的调控作用对照组和各苦参碱干预组的MMP-9/β-actin光密度比值分别为0.820±0.016、0.648±0.022、0.416±0.067、0.222±0.019。与对照组比较,苦参碱各浓度组MMP-9mRNA表达量均降低(P<0.05),各苦参碱干预组组间差异显著(P<0.05)。苦参碱抑制MMP-9mRNA表达的作用具有明显的浓度依赖性。(6)苦参碱对A549细胞MMP-9蛋白表达水平的调控作用对照组和各苦参碱干预组MMP-9蛋白表达的积分光密度值分别为0.392±0.133、0.381±0.202、0.251±0.088、0.152±0.182。与对照组比较,苦参碱0.1250g/L和0.2500g/L组MMP-9蛋白的表达量均明显降低(P<0.05),而0.0625g/L组下降差异无显著性。各苦参碱干预组组间差异显著(P<0.05)。苦参碱抑制MMP-9蛋白表达量的作用具有明显的浓度依赖性。结论：(1)苦参碱能抑制A549细胞的体外增殖,其抑制作用表现出浓度依赖性。(2)苦参碱能显著抑制A549细胞的粘附、迁移和侵袭能力,其抑制作用表现出浓度依赖性。(3)苦参碱能下调A549细胞MMP-9mRNA及蛋白的表达,其抑制作用表现出浓度依赖性。(4)苦参碱可能通过下调A549细胞MMP-9mRNA及蛋白的表达而显著抑制细胞的侵袭转移能力。