疫苗接种是预防传染病的主要手段,且重组蛋白疫苗等新型疫苗可以很好的解决传统疫苗病原体复活的潜在危险,但重组蛋白的高纯度通常会使其免疫原性有所减弱,需要加入佐剂成分来增强抗原递呈细胞对抗原的摄取和递呈,延长抗原的作用时间。在本文中,我们首先对RBD和RBD-Fc两种蛋白的免疫原性进行了研究,确定目标抗原分子;接着,通过比较细菌DNA与Cp G ODN 2395的佐剂效果,确定目标TLR9激动剂。鉴于外源性核酸分子易水解的缺点,应用典型四组分阳离子脂质纳米颗粒进行递送以延长其作用时间;与此同时,为了获得毒副作用弱的重组蛋白疫苗,通过优化脂质纳米颗粒的组成成分,并采用一系列分析技术对脂质纳米颗粒进行表征,证明了LNP已成功制备并可进行后续实验。实验结果表明,与应用于m RNA疫苗中的四组分脂质纳米颗粒相比,使用三组分可离子化脂质纳米颗粒递送TLR9激动剂作为疫苗佐剂系统时可产生最高的抗体水平。本文主要的研究内容和成果如下:1.通过抗体效价检测实验可知带有Fc蛋白标签的抗原RBD-Fc比无标签抗原RBD可诱导机体更高的抗体水平。2.通过对由CTAB法提取得到的卡介苗基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳发现其分子量在200 bp～750 bp之间,远大于仅由22个脱氧核糖核苷酸组成的Cp G ODN,说明提取得到的DNA片段中含有非甲基化Cp G基序的可能性较大。而动物实验结果表明,虽然裸露的卡介苗基因组DNA和Cp G ODN均有佐剂效果,但Cp G ODN的佐剂作用更强。3.应用纳米颗粒合成系统合成四组分脂质纳米颗粒递送Cp G ODN,空载粒子的粒径分布范围在60～150 nm之间,TEM结果显示脂质纳米颗粒表面光滑,颗粒间无聚集现象。动物实验结果表明,与永久性阳离子脂质纳米颗粒相比,应用可离子化脂质Dlin-MC3-DMA替换后可诱导更高的抗体滴度。4.对脂质纳米颗粒的组成成分进行简化,并通过一系列表征证明已成功制备二组分和三组分脂质纳米颗粒。此外,抗体效价检测结果表明应用三组分可离子化脂质纳米颗粒递送时诱导机体产生最高的抗体水平。5.综合抗体效价检测结果和组织切片病理分析结果表明,应用三组分的可离子化脂质纳米颗粒递送Cp G ODN作疫苗佐剂系统具有更进一步研究的潜在意义。